Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:20 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples que contenga diluciones en serie del compuesto de prueba, un antibiótico aminoglucósido.
Agregue una suspensión de Mycobacterium tuberculosis, una bacteria patógena, en los pozos e incube.
En el citoplasma, el compuesto de prueba se une a la subunidad ribosómica micobacteriana 30S, inhibiendo la síntesis normal de proteínas y, finalmente, provocando la muerte de las micobacterias.
Después de la incubación, agregue resazurina, un tinte soluble en agua débilmente fluorescente, a los cultivos. Incubar.
Dentro de las micobacterias metabólicamente activas viables, las enzimas deshidrogenasas reducen la resazurina de color azul a una resorufina fluorescente de color rosa.
Con un lector de placas de fluorescencia, mida la intensidad de la fluorescencia de la resorofina en los pocillos.
Un valor de baja intensidad de fluorescencia con concentraciones crecientes de compuestos de prueba sugiere sus efectos citotóxicos contra las micobacterias.
Para realizar un ensayo de resazurina, cultivar M. tuberculosis en la fase 7H9ADST hasta la fase logarítmica media. Diluir el cultivo con 7H9ADST a un DE600 de 0,01. Use 7H9ADST para diluir los compuestos al doble d
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