Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:34 min. • July 8th, 2025
Tome una microplaca que contenga células de mamíferos en hielo.
Agregue un medio que contenga calcio a los pozos seleccionados y un medio sin calcio a los demás.
Introducir monómeros de una toxina bacteriana formadora de poros. Una temperatura baja evita la agregación de monómeros, facilitando la unión al colesterol de la membrana celular.
Incubar a una temperatura fisiológica, permitiendo que los monómeros unidos al colesterol se oligomericen y se inserten en la membrana, formando un poro.
En pozos con calcio extracelular, el poro causa la entrada de calcio.
La afluencia desencadena el desprendimiento exosomal de la toxina y el resellado de la membrana.
El aumento de calcio intracelular también induce la exocitosis lisosomal, liberando una enzima que convierte la esfingomielina de la membrana en ceramida.
La membrana enriquecida con ceramidas desencadena la endocitosis de toxinas, volviendo a sellar la membrana.
El resellado de la membrana se ve obstaculizado en pocillos sin calcio extracelular.
Agregue yoduro de propidio o PI, un tinte fluorescente, que no puede ingresar a las células con una membrana reparada, pero ingresa a las células dañadas para unirse al ADN, emitiendo fluo
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