Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 6:20 min. • July 8th, 2025
Tome células de órganos linfoides secundarios de un ratón inmunizado con antígeno, que contienen células T CD8+ específicas de antígeno en diferentes etapas del ciclo celular.
G1, S, G2 y M son etapas de células que se dividen activamente, mientras que las células en la etapa G0 están inactivas.
Agregue un colorante de viabilidad fluorescente para marcar las células muertas y los anticuerpos marcados con fluoróforo que se unen a los marcadores de superficie de las células T CD3 y CD8.
Introducir multímeros antigénicos de péptido-MHC conjugados con fluoróforos para unirse a los receptores de células T, marcando las células T específicas de antígeno.
Con un tampón, fije y permeabilice las células.
Introducir anticuerpos marcados con fluoróforo para unirse a una proteína nuclear asociada a la proliferación celular, tiñendo las células que se dividen activamente.
Agregue una tinción fluorescente para etiquetar el ADN.
Mediante citometría de flujo, seleccione las células vivas e identifique las células T CD8+ específicas de antígeno a través de las etiquetas unidas a la superficie.
La intensidad de la tinción de ADN discrimina las células G0 y G1 con una cantidad de ADN más baja de las
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