Uso de sondas de tensión basadas en ADN para evaluar las fuerzas receptoras aplicadas por las células inmunitarias
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:58 min. • July 8th, 2025
Comience con un cubreobjetos de vidrio funcionalizado con nanopartículas de oro ancladas con polietilenglicol.
Agregue sondas de tensión de horquilla de ADN que contengan una horquilla de ADN hibridada con dos oligonucleótidos en brazos opuestos.
La hebra del ligando incluye un fluoróforo y biotina, mientras que la hebra de anclaje contiene un extintor y un grupo tiol. En esta configuración, el apagador suprime la fluorescencia.
Las sondas de ADN se unen a las nanopartículas de oro, anclándose al cubreobjetos de vidrio.
Introducir estreptavidina, interactuando con las moléculas de biotina de las hebras de ligandos.
Agregue ligandos biotinilados que se unan a moléculas de estreptavidina preunidas.
Superponga el cubreobjetos con células T CD8 positivas; sus receptores interactúan con ligandos inmovilizados, formando un sitio de interacción receptor-ligando.
Esta interacción genera una fuerza que despliega la estructura de horquilla del ADN, separando el fluoróforo del extintor y promoviendo la emisión de fluorescencia.
Introduzca hebras de bloqueo no fluorescentes que interactúen con los segmentos desplegados de las sondas para preservar la señal de fluorescencia.
Cuantificar la fluo
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