Ensayo basado en CFSE para controlar la migración de células dendríticas de la piel a los ganglios linfáticos drenantes en ratones infectados
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:34 min. • July 8th, 2025
Tomemos un ratón anestesiado. Inyecte la suspensión de Mycobacterium bovis BCG en la almohadilla de la pata trasera.
Las células dendríticas de la piel reconocen y fagocitan las micobacterias.
Además, los componentes micobacterianos procesados se presentan en moléculas MHC de clase II.
Inyecte el tinte CFSE permeable a las células en la misma almohadilla para los pies.
Las esterasas intracelulares escinden el CFSE en un producto fluorescente impermeable a las células, tiñendo las células.
Además, las células dendríticas activadas migran a través de los vasos linfáticos al ganglio linfático poplíteo, activando las células T.
Extirpar quirúrgicamente el ganglio linfático poplíteo y homogeneizarlo a través de un colador, obteniendo una suspensión unicelular.
Centrifugar y volver a suspender las células en un tampón.
Transfiera las células a un tubo de citometría de flujo. Centrifugar y tratar las células con un cóctel de anticuerpos.
Los anticuerpos bloqueadores de Fc bloquean los receptores Fc, mientras que los anticuerpos marcados con fluoróforos se unen a los marcadores de superficie CD11c y las moléculas MHC de clase II en las células inmunitarias.
Mediante citometría de flujo, id
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