Evaluación en tiempo real de la actividad antifúngica de las células inmunitarias humanas primarias

Comience con un plato de imágenes a base de vidrio que contenga una suspensión de neutrófilos humanos, o células inmunes, y visualícelo bajo un sistema de imágenes de fluorescencia.

Introduzca conidios fluorescentes de Aspergillus modificados genéticamente, o esporas de hongos, y capture imágenes a intervalos regulares de hasta 6 horas.

Las esporas de hongos expresan proteínas fluorescentes rojas y están marcadas externamente con fluoróforos magenta no degradables, lo que ayuda a distinguir las células muertas de las vivas.

Durante la incubación, los neutrófilos interactúan con moléculas asociadas a patógenos en conidios a través de receptores de reconocimiento de patrones, lo que facilita su engullimiento dentro de un fagosoma.

Más tarde, el fagosoma se fusiona con el lisosoma que contiene enzimas, formando un fagolisosoma.

Dentro del fagolisosoma, las especies reactivas de oxígeno y las enzimas degradan los conidios.

Durante las imágenes de células vivas, en el punto de tiempo inicial, la fluorescencia intensa de color rojo y magenta dentro del fagosoma de los neutrófilos indica la presencia de conidios vivos.

Con el tiempo, una disminución de la fluorescencia roja con la retenci