Un ensayo de inhibición del crecimiento diferido para evaluar el efecto de los compuestos antimicrobianos derivados de bacterias

Comience con una placa de agar que contenga nutrientes y coloque una gota de un cultivo nocturno de bacterias primarias productoras de inhibidores en el centro.

Deje que el cultivo se seque, asegurando una propagación mínima de bacterias, e incube.

Las bacterias individuales forman colonias distintas y secretan compuestos antimicrobianos, moléculas inhibidoras que se difunden a través del agar a cierta distancia.

Rocíe un cultivo diluido de una cepa bacteriana competidora de manera uniforme sobre la superficie del agar que contiene colonias de bacterias primarias.

Durante la incubación, los compuestos antimicrobianos interactúan con las bacterias competidoras e interrumpen sus procesos celulares esenciales.

Esto da como resultado la muerte de bacterias competidoras en esa área específica, lo que provoca una disminución significativa en el crecimiento bacteriano.

En el área sin compuestos antimicrobianos, las bacterias competidoras utilizan los nutrientes y forman colonias distintas.

Esto crea un patrón de crecimiento diferencial con una zona distinta de inhibición. Determine el diámetro de esta zona y la claridad de la zona para evaluar el efecto de los compuestos antimicrobianos derivados de bacterias.

Para preparar cultivos bacterianos durante la noche, coloque las cepas competidoras e inhibidoras en una placa de agar BHI estéril e incube a 37 grados Celsius aeróbicamente durante aproximadamente 18 horas. En una botella universal de 28 mililitros, inocule 10 mililitros de caldo BHI estéril con una sola colonia de la cepa bacteriana competidora requerida.

Incube el cultivo en un agitador orbital universal a 37 grados Celsius y 250 RPM durante la noche. Al día siguiente, asegúrese de que las placas de agar estén completamente secas y sin condensación en la tapa para evitar que la inoculación se propague en la placa. Pipetear 25 microlitros del cultivo nocturno en el centro de las placas de agar, evitando presionar completamente el émbolo de la pipeta para evitar burbujas de aire que rocíen el cultivo a través del agar.

Deje que el cultivo se seque a temperatura ambiente para limitar la propagación del cultivo. Luego, incube las placas de agar a 37 grados Celsius aeróbicamente durante la noche. Después de cultivar un cultivo durante la noche mientras trabaja bajo un gabinete de seguridad de nivel 2 forrado con papel absorbente, use caldo BHI para diluir el cultivo diez veces para producir aproximadamente 4 veces 10 a la sexta UFC por mililitro. Luego, vierta el cultivo diluido en una botella vaporizadora de perfume de plástico estéril.

Para llevar a cabo un ensayo de inhibición del crecimiento diferido, rocíe el cultivo a través de cada una de las botellas del vaporizador para asegurarse de que el cultivo se cargue en el mecanismo de pulverización antes de rociar sobre el agar. Desde una distancia de aproximadamente 15 centímetros por encima del agar, rocíe aproximadamente 250 microlitros de cultivo diluido sobre toda la superficie del agar. Incube las placas a 37 grados centígrados aeróbicamente durante la noche.

Para interpretar la inhibición del crecimiento diferido, mida la zona de inhibición del crecimiento de la cepa competidora rociada en milímetros, restando el diámetro del punto central del productor del inhibidor. Finalmente, registre la puntuación de claridad para las zonas de inhibición de acuerdo con el protocolo de texto.