Un ensayo para cuantificar Salmonella citosólica y vacuolar en macrófagos primarios infectados
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 6:27 min. • July 8th, 2025
Tome un cultivo de macrófagos derivados de la médula ósea. Retire el medio y agregue la bacteria Salmonella, que expresa una proteína citoplasmática fluorescente.
Centrifugar para facilitar el contacto bacteria-macrófago e incubar.
Las bacterias se unen a los receptores de macrófagos, facilitando la internalización dentro de un fagosoma.
El fagosoma se fusiona con vesículas derivadas del endosoma y, simultáneamente, las bacterias secretan efectores, remodelando el fagosoma en una vacuola o VCE que contiene Salmonella.
Un subconjunto de VCE se rompe, liberando bacterias internalizadas en el citoplasma.
Agregue un antibiótico para eliminar las bacterias no internalizadas. Aspirar el medio que contiene bacterias muertas.
Introduzca un tampón que contenga el detergente digitonina, que se une al colesterol.
La unión de la digitonina a la membrana plasmática rica en colesterol da como resultado la formación de poros, mientras que la membrana del VCE deficiente en colesterol permanece intacta, un fenómeno denominado permeabilización diferencial.
Agregue anticuerpos marcados con fluorescencia que ingresen a las células permeabilizadas para unirse a las bacterias citosólicas.
Use un deterge
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