Un ensayo celular para la identificación de agentes que interactúan con CXCR4
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:52 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples recubierta de gelatina que contenga células de cáncer cerebral humano adheridas que expresan CXCR4.
Reemplace los medios con un tinte sensible al calcio. Las esterasas intracelulares escinden el tinte en un producto impermeable a la membrana que se une a los iones de calcio, exhibiendo una mayor fluorescencia.
Retire el tinte, lave y agregue tampón.
Coloque la placa en un lector de microplacas de fluorescencia con placas que contienen compuestos que interactúan con CXCR4 y quimiocinas que contienen CXCL12.
Usando parámetros automatizados establecidos, inyecte concentraciones crecientes de compuestos en pozos de prueba, seguido de una concentración específica de CXCL12.
En pocillos de control sin el compuesto, CXCL12 se une a CXCR4.
Esta unión activa una cascada de señalización, liberando iones de calcio en el citoplasma, donde se unen al tinte, intensificando la fluorescencia.
Sin embargo, en los pocillos de prueba, los compuestos que interactúan inhiben la unión de CXCL12 a CXCR4, lo que afecta la movilización de calcio y provoca una disminución de la fluorescencia dependiente de la dosis, confirmándolos como antagonistas de CXCR4.
El día del p
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