Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:20 min. • July 8th, 2025
La α-galactosidasa A y la α-glucosidasa ácida son enzimas lisosomales cruciales para el metabolismo celular.
La α-galactosidasa A descompone sustratos como los glicolípidos, mientras que la α-glucosidasa ácida hidroliza el glucógeno.
Para medir su actividad enzimática in vitro, tome pocillos de placas de varios pocillos con muestras que contengan concentraciones conocidas de α-galactosidasa A y ácido α-glucosidasa, respectivamente.
Agregue el volumen requerido de soluciones ácidas de sustratos sintéticos de 4-metilumbeliferil a los pocillos, sustratos fluorogénicos específicos diseñados para imitar sustratos naturales para estas enzimas.
Incubar en la oscuridad.
α-galactosidasa A y las enzimas ácidas α-glucosidasa escinden sus respectivos sustratos, liberando el producto fluorescente, 4-metilumbeliferona.
Agregue un tampón alcalino para terminar la reacción enzimática.
Usando un lector de fluorescencia de microplacas, mida la intensidad de fluorescencia de la 4-metilumbeliferona en los pocillos, indicativa de su concentración, para determinar la actividad de la enzima α-galactosidasa A y la α-glucosidasa ácida, respectivamente.
Diluya la cantidad calculada de cada muestra y pipetee
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