Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:04 min. • July 8th, 2025
Comience con una ADNzima de escisión de ARN, un ADN catalítico que, al unirse a un biomarcador bacteriano específico, se activa.
La DNAzyme está unida a una perla magnética recubierta de estreptavidina a través de biotina en su extremo 5'. En el extremo 3', está unido a una ureasa ligada a oligonucleótidos, formando una perla magnética funcional.
A un tubo que contenga perlas magnéticas funcionales, agregue un lisado de E. coli.
Un biomarcador específico de E. coli del lisado activa la ADNzima, desencadenando la escisión del enlace ARN, provocando el desprendimiento del conjugado ADNzima-ureasa.
Utilice un soporte magnético para inmovilizar las perlas y retire el conjugado ADNzyme-ureasa unido a las perlas.
Transfiera el sobrenadante que contiene ureasa liberado a otro tubo.
Agregue un tinte indicador de pH: rojo de fenol y una solución de urea.
La ureasa hidroliza la urea en amoníaco y dióxido de carbono.
El amoníaco, una base débil, eleva el pH de la solución, provocando un cambio de color, que indica la presencia del biomarcador E. coli.
Después de preparar las células de E. coli de acuerdo con el protocolo de texto, prelave un tubo de microfuga de 1,5 mililitros agregando y agi
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