Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:10 min. • July 8th, 2025
Tome pocillos que contienen hidrogeles de poliacrilamida de rigidez variable recubiertos con colágeno, imitando una matriz extracelular fisiológica o ECM.
Agregue células endoteliales microvasculares que forman adherencias focales, o FA, complejos que median la unión de la ECM celular, para detectar la rigidez del hidrogel.
Los hidrogeles más rígidos elevan la expresión de vimentina en la superficie celular, un componente citoesquelético, en comparación con los hidrogeles más blandos.
Agregue la bacteria Listeria monocytogenes, diseñada para expresar una proteína fluorescente bajo el promotor de la proteína inductora del ensamblaje de actina, o ActA.
Centrifugar para sincronizar el contacto bacteriano con las células huésped e incubar.
Las bacterias se unen a la vimentina. Más vimentina en las células huésped más rígidas unidas a hidrogel conduce a una mayor adherencia bacteriana y endocitosis.
Agregue un antibiótico, eliminando las bacterias no internalizadas.
Las bacterias internalizadas secretan toxinas, rompiendo la membrana del endosoma. El escape citoplasmático activa el promotor ActA para expresar la proteína fluorescente, marcando bacterias intracelulares.
Desprender enzimá
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