Un ensayo de utilización de ATP para determinar la supervivencia bacteriana bajo tratamiento con antibióticos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:56 min. • July 8th, 2025
Comience sembrando un cultivo bacteriano en una placa de ensayo. Luego, incube el plato.
Las células bacterianas tienen adhesinas superficiales y pili que les permiten adherirse entre sí, formando pequeños agregados.
Agregue concentraciones variables de antibióticos a los pocillos, dejando uno sin tratar para un control.
Las moléculas de antibióticos interactúan con bacterias sensibles, afectando su capacidad para crecer y reproducirse, lo que lleva a su muerte.
Las bacterias resistentes a los antibióticos permanecen metabólicamente activas, produciendo moléculas de ATP.
Use un sonicador para alterar las células bacterianas, liberando su contenido intracelular, incluido el ATP.
Agregue reactivo de brillo de utilización de ATP que contenga luciferina, enzima luciferasa y otros cofactores.
La luciferasa utiliza ATP y oxígeno para convertir la luciferina en una oxiluciferina excitada.
Posteriormente, la oxiluciferina pasa a su estado fundamental, emitiendo luz luminiscente.
Mida la absorbancia con un lector de placas.
La disminución de la absorbancia a concentraciones más altas de antibióticos sugiere una menor producción de ATP, lo que indica una tasa de supervivencia bacteriana redu
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