Ensayo in vitro para evaluar el impacto inmunomodulador de los monocitos en la proliferación de leucocitos

Tome una placa de pocillos múltiples con cultivo de células madre mesenquimales adherentes, o MSC.

Agregue células mononucleares de sangre periférica, o PBMC, e incube.

Las MSC secretan factor de crecimiento de hepatocitos, induciendo a los monocitos a adquirir un fenotipo inmunomodulador, produciendo interleucina-10 o IL-10.

Transfiera el sobrenadante que contiene PBMC a un tubo.

Agregue perlas magnéticas recubiertas de anticuerpos que se unan al marcador de superficie de monocitos CD14.

Utilice un separador magnético para aislar los monocitos CD14+ y agréguelos a pocillos de placas de pocillos múltiples en concentraciones crecientes.

Introduzca células T efectoras CD4+ marcadas con CFSE de tinte fluorescente.

Agregue microperlas conjugadas con anticuerpos que se unan específicamente a los marcadores de superficie de las células T CD3 y CD28, activando las células.

En los monocitos de control que carecen de pozos, proliferan las células T activadas, y cada división celular disminuye la intensidad de fluorescencia CFSE en las células hijas.

Sin embargo, en los cocultivos, los monocitos inducidos por MSC secretan IL-10, suprimiendo la proliferación de células T efectoras.

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