Cuantificación basada en citometría de flujo de células cancerosas senescentes inducidas por terapia
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:19 min. • July 8th, 2025
Tomemos las células cancerosas pretratadas con un fármaco de quimioterapia que induce la senescencia en un porcentaje de células.
Estas células acumulan gránulos de lipofuscina autofluorescente, un marcador de senescencia conocido.
Agregue un antibiótico que ingrese a las células e inhiba las bombas de protones lisosomales, evitando la acidificación lisosomal.
Un aumento del pH inactiva las enzimas lisosomales.
Las células senescentes sobreexpresan la β-galactosidasa lisosomal incluso a pH casi neutro, lo que la convierte en un biomarcador de senescencia.
Introducir un sustrato de β-galactosidasa. Incubar.
La β-galactosidasa hidroliza el sustrato internalizado en un producto fluorescente, marcando las células senescentes.
Centrifugar y desechar el sobrenadante.
Agrega un tinte de viabilidad celular. Dentro de las células vivas, las esterasas activas convierten el tinte en un producto fluorescente impermeable a la membrana. Las células muertas con integridad de membrana comprometida permanecen sin teñir.
Mediante citometría de flujo, detecte las células viables que muestran los marcadores duales lipofuscina y sustrato fluorescente de β-galactosidasa, lo que indica células senescente
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