Un método para la preparación de muestras para visualizar bacterias formadoras de biopelículas en hifas fúngicas

Introduzca una colonia de hongos unida al celofán en una suspensión bacteriana marcada con fluorescencia. Retire el celofán e incube.

Las células bacterianas se adhieren a la superficie del hongo a través de moléculas y receptores de superficie. Las bacterias adheridas secretan sustancias poliméricas extracelulares que consisten en polisacáridos, proteínas y ADN, atrapando las células bacterianas y formando la base estructural de la biopelícula.

Enjuague la sección en una solución salina fuerte para eliminar las bacterias sueltas

En un tampón de fosfato, corte una sección de la colonia.

Transfiera la sección a agua estéril que contenga aglutinina de germen de trigo o WGA unida a un tinte rojo fluorescente.

WGA, una proteína vegetal, se une a los residuos de N-acetilglucosamina y ácido siálico, lo que permite que el tinte adherido emita fluorescencia en la pared celular del hongo.

Enjuague la sección en un tampón de fosfato.

Sumerja parcialmente una diapositiva en el búfer. Deja que la sección flote sobre él. Levante suavemente para que la sección se asiente sin interrumpir la biopelícula.

Coloque un medio de montaje, seguido de un cubreobjetos para el análisis microscópico.

Después