Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:11 min. • July 8th, 2025
Tome un cultivo de células de mamíferos que exprese el dominio repetido de la proteína tau de unión a microtúbulos.
Estos reporteros tau citoplasmáticos poseen una mutación propensa a la agregación y existen como monómeros.
Los reporteros se fusionan con el fluoróforo A o B, y el espectro de emisión del primero se superpone con el espectro de absorción del segundo.
Agregue un liposoma complejado con semillas de tau o agregados fibrilares de tau de longitud completa.
Al ingresar a la célula, el liposoma libera las semillas en el citoplasma.
Las semillas liberadas median la agregación de los reporteros tau, lo que acerca al fluoróforo A al fluoróforo B.
Agregue tripsina para separar las células, luego realice la fijación.
Analice las células con un citómetro de flujo.
Debido a la proximidad dentro del agregado, tras la excitación, la transferencia de energía del fluoróforo A al B a través de una interacción dipolo-dipolo se denomina transferencia de energía de resonancia de fluorescencia o FRET.
El fluoróforo B excitado emite una señal FRET, cuya presencia indica agregación de proteínas.
Para volver a colocar las células biosensoras en condiciones estériles, enjuague cada línea celul
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos