Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:10 min. • July 8th, 2025
Prepare una mezcla de transfección agregando un polímero catiónico apropiado y vectores plásmidos separados para genes de anticuerpos de cadena pesada y cadena ligera.
El polímero cargado positivamente se une a los plásmidos cargados negativamente, formando complejos.
Agregue esta mezcla de transfección a una placa de múltiples pocillos que contenga cultivo de células renales embrionarias humanas en un medio sin suero e incube.
Los complejos ingresan a las células a través de la endocitosis, causando hinchazón y ruptura endosómica, liberándolos en el citoplasma.
El polímero catiónico produce poros en la membrana nuclear, lo que facilita la entrada de vectores y permite su transcripción, seguida de la traducción en proteínas de cadena pesada y ligera.
Estas proteínas se mueven al retículo endoplásmico, donde las proteínas de cadena pesada y ligera se dimerizan y se unen covalentemente mediante enlaces disulfuro, formando anticuerpos.
Los anticuerpos viajan al aparato de Golgi para modificaciones postraduccionales adicionales y se empaquetan en vesículas para su liberación extracelular.
Recolecte el medio que contiene los anticuerpos liberados. Agregue un medio sin suero para la gene
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