Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:51 min. • July 8th, 2025
Tome un ratón inmunizado con una metalopeptidasa. Cosecha el bazo y obtén una suspensión celular.
Filtrar la suspensión a través de una malla y centrifugar, eliminando los restos de tejido.
Las células aisladas incluyen células B específicas de metalopeptidasa, que producen anticuerpos contra los epítopos de metalopeptidasa.
Agregue células de mieloma inmortales que carecen de la enzima HGPRT, evitando el rescate de nucleobases para la síntesis de nucleótidos. Sobreviven a través de la síntesis de nucleótidos de novo.
Centrifugar para obtener un pellet y desechar el sobrenadante.
Agregue PEG e incube, induciendo la fusión de células B de mieloma para formar hibridomas inmortales positivos para HGPRT.
Agregue medio HAT que comprenda hipoxantina, aminopterina y timidina. Transfiera a pocillos que contienen una capa alimentadora de macrófagos peritoneales, promoviendo el crecimiento de hibridomas.
La aminopterina bloquea la síntesis de nucleótidos de novo, lo que provoca la muerte de las células de mieloma no fusionadas. Las células B no fusionadas mueren debido a su corta vida útil.
Los hibridomas positivos para HGPRT rescatan los precursores de nucleótidos hipoxantina y timidina, pr
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