Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:38 min. • July 8th, 2025
Comience con un tubo que contenga un agente de transfección a base de lípidos catiónicos y agregue plásmidos de expresión recombinantes.
El plásmido lleva un gen que codifica anticuerpos recombinantes dirigidos a la metalopeptidasa y proteína verde fluorescente o GFP bajo un promotor, mientras que el gen de resistencia a los antibióticos está bajo otro promotor.
Los lípidos cargados positivamente interactúan con un plásmido cargado negativamente, formando un complejo.
Transfiera los complejos a una placa de múltiples pocillos que contenga células de mamíferos, lo que permite que el plásmido ingrese al citoplasma.
El plásmido llega al núcleo y se transcribe en ARNm para proteínas de resistencia a antibióticos y ARNm bicistrónicos que codifican anticuerpos recombinantes y GFP.
Estos ARNm conducen a la producción de anticuerpos recombinantes, GFP y proteínas de resistencia a los antibióticos.
Después de la transfección, reemplace el medio con un medio enriquecido con suero.
Introducir un antibiótico, eliminando selectivamente las células no transfectadas mientras las células transfectadas resistentes a los antibióticos sobreviven.
Usando la técnica de clasificación de células activada
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