Una técnica para generar anticuerpos monoclonales a partir de células B específicas de antígeno

Tomemos vectores de expresión eucariotas, que codifican una cadena pesada de anticuerpos o una cadena ligera de anticuerpos, clonados a partir de células B específicas de antígeno.

Introducir polietilenimina, un polímero catiónico, que interactúa electrostáticamente con los vectores cargados negativamente, formando poliplexos.

Incubar células de mamíferos con los poliplexos, que se adhieren a las células y se internalizan mediante endocitosis. Los endosomas resultantes se fusionan con los lisosomas.

Los polímeros en los poliplex causan hinchazón osmótica de la vesícula, lo que lleva a su ruptura y liberación de los vectores.

Los vectores liberados ingresan al núcleo y se transcriben en ARNm de cadena pesada y cadena ligera, que se traducen a través de ribosomas en el retículo endoplásmico.

Las cadenas peptídicas resultantes se ensamblan en anticuerpos, que se transportan al Golgi y se empaquetan en vesículas secretoras.

Tras la fusión de las vesículas secretoras y la membrana celular, los anticuerpos se liberan extracelularmente.

Coseche el sobrenadante que contiene anticuerpos para ensayos posteriores.

Siembre 15,000 células renales embrionarias humanas en 200 microlitros de Eagle