Entrega de anticuerpos mejorada por convección en el cerebro de un ratón

Asegure un ratón anestesiado que tenga una incisión craneal en la línea media a un marco estereotáctico.

Detecte el bregma, un punto de referencia en el cráneo, y determine el lugar de la inyección.

Cree un orificio de rebaba en el lugar, evitando dañar la duramadre que cubre el cerebro.

Tome un catéter escalonado cargado de anticuerpos, montado en un robot estereotáctico y conectado a una bomba de infusión.

El catéter comprende un capilar de sílice fusionado que sobresale de una aguja de metal, creando un diámetro exterior escalonado en el punto de fusión.

Inserte el catéter en el parénquima cerebral. Encienda la bomba de infusión para crear un gradiente de presión en la abertura del catéter y administrar los anticuerpos a una velocidad controlada, una técnica conocida como administración mejorada por convección.

El diámetro escalonado comprime el tejido, creando un sello.

El sello evita el reflujo de líquidos y permite la distribución de grandes volúmenes de anticuerpos al tiempo que reduce el riesgo de daño tisular.

Para la inyección de anticuerpos en el cuerpo estriado murino, confirme la falta de respuesta al pellizco de la piel en un ratón anestesiado y afeite la cabeza con un cortapelos. Desinfecte la piel con hisopos de algodón empapados en solución de yodo.

Use un bisturí para hacer una incisión cutánea de 10 milímetros a lo largo de la línea media craneal que termine a la altura de los ojos. Fije el mouse en el marco estereotáctico con la abrazadera nasal y las barras para los oídos, teniendo cuidado de que la superficie del cráneo esté horizontal y bien asegurada.

Coloque la jeringa en el robot estereotáctico y sincronice la broca con la punta del catéter en un punto de referencia. Use fórceps para retraer la piel y localice el bregma en la superficie del cráneo. Haga referencia al bregma en el software usando la punta de la broca y mueva el taladro a una posición frontal de 1 milímetro y lateral de 2 milímetros desde la posición de bregma.

Taladre un orificio de rebaba, teniendo cuidado de no dañar la duramadre, y mueva la jeringa sobre el orificio de rebaba. Dispense de 0,5 a 1 microlitro de la jeringa para asegurarse de que no queden burbujas de aire en el catéter. Comience la administración mejorada por convección como se demuestra, observando la superficie del cráneo en busca de rastros de reflujo de líquido desde el punto de inyección.

Al final de la administración y la extracción del catéter, encienda la bomba de inyección a 0.2 microlitros por minuto para verificar si hay evidencia de obstrucción del catéter durante la inyección. Si no se produjo ninguna obstrucción, se debe observar inmediatamente una gota de mezcla inyectable proveniente de la punta del catéter.