Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:28 min. • July 8th, 2025
Tome una columna de FPLC que contenga una resina de vidrio porosa con proteína A inmovilizada, una proteína bacteriana que se une a anticuerpos. Equilibre la columna con un tampón de pH neutro.
Agregue líquido de cultivo celular recolectado de células ováricas de hámster chino, que contiene anticuerpos monoclonales y proteínas y ADN contaminantes.
La proteína A se une a la región Fc del anticuerpo, inmovilizándolos.
Algunos contaminantes se adhieren de forma no específica a la resina, mientras que el resto fluye.
En el cromatograma, una mayor absorbancia UV durante la carga de la muestra indica una alta concentración de proteínas en el flujo.
Lavar con el tampón de equilibrio para eliminar los contaminantes no unidos, indicados por una disminución de la absorbancia.
Enjuague con un tampón con alto contenido de sal, interrumpiendo las interacciones no específicas y eliminando los contaminantes, indicados por un pequeño pico de impurezas.
Agregue un tampón de elución de pH bajo para interrumpir la interacción entre la proteína A y el anticuerpo y eluya los anticuerpos, que se recolectan mediante el seguimiento del pico correspondiente.
Neutralizar el pH de los anticuerpos recolectado
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