Detección de autoanticuerpos de islotes humanos mediante un ensayo de electroquimioluminiscencia
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 6:09 min. • July 8th, 2025
Para detectar autoanticuerpos de islotes, un biomarcador de la diabetes tipo 1, tome muestras de suero humano y agregue ácido acético para inhibir los componentes que interfieren.
Incube y luego agregue un tampón alcalino para neutralizar el ácido.
Transfiera el suero tratado a una placa de pocillos múltiples que contenga una mezcla de autoantígenos de islotes humanos, incluidos los antígenos de captura biotinilados y conjugados con rutenio, cada uno a una concentración óptima para el ensayo.
El autoanticuerpo de los islotes en la muestra positiva une el antígeno conjugado con rutenio al antígeno de captura biotinilado, formando un complejo antígeno-anticuerpo.
Transfiera la mezcla a una placa de electroquimioluminiscencia recubierta de estreptavidina pretratada con un agente bloqueador y equipada con electrodos de trabajo y contraelectrodos.
Incubar para permitir interacciones complejas biotiniladas con la estreptavidina unida y luego lavar.
Agregue un tampón que contenga tripropilamina o TPA.
En un instrumento de electroquimioluminiscencia, la aplicación de voltaje entre los electrodos inicia la oxidación del rutenio y el TPA, generando radicales TPA.
Los radicales TPA excitan co
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