Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:31 min. • July 8th, 2025
Comience con una placa de cultivo que contenga criosecciones de yeyuno de ratón rellenas de gelatina fijadas en formol con células de mechón con microvellosidades apicales y soma en forma de carrete.
Lavar con un tampón que contenga detergente para permeabilizar las membranas celulares.
Agregue una solución alcalina de recuperación de antígenos. Incubar para romper los enlaces cruzados de proteínas inducidos por la fijación, revelando las proteínas para la tinción.
Aplique una solución de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Superposición con anticuerpos primarios dirigidos a una proteína de unión a actina, específicamente fosforilada en células de mechón.
Eliminar los anticuerpos no unidos. Introduzca una mezcla de anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforo, colorante de unión al ADN y conjugado de colorante fluorescente de faloidina.
Los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios, el conjugado de colorante fluorescente faloidina marca la actina y el colorante de unión al ADN marca los núcleos celulares.
Retire los componentes no unidos y agregue un tampón sin detergente.
Transfiera la sección a un portaobjetos de vidrio recubierto co
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