Una técnica de inmunofluorescencia de doble marcaje para visualizar proteínas del huésped y del patógeno en una célula infectada

Comience con células epiteliales fijas y permeabilizadas infectadas con un parásito patógeno.

Agregue un tampón de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.

Superposición con anticuerpos primarios policlonales de ratón, que interactúan específicamente con las proteínas del parásito.

Agregue anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo rojo lejano que interactúan con anticuerpos primarios unidos a proteínas parásitas.

Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos. Bloquee con anticuerpos anti-ratón que se unen a anticuerpos primarios, minimizando la reactividad cruzada durante el etiquetado huésped-proteína.

Agregue anticuerpos primarios monoclonales de ratón dirigidos a las ribonucleoproteínas del huésped dentro de las células epiteliales.

Se superpone con una mezcla de anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo verde y faloidina conjugada con fluoróforo rojo, lo que facilita el etiquetado de anticuerpos primarios unidos a proteínas del huésped y actina, respectivamente.

Lavar con un tampón. Montar con un medio que contenga tinción de ADN, impartiendo una coloración azul al núcleo del huésped, al núcleo del parásito y al cinetoplasto.

Analice las muestras