Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:29 min. • July 8th, 2025
Comience con un matraz que contenga células de mamífero transfectadas de manera estable en un medio sin suero complementado con un tensioactivo no iónico para evitar la agregación celular.
Estas células llevan un genoma modificado que contiene genes integrados de cadena pesada y ligera para la producción de anticuerpos terapéuticos.
Introduzca triptona, una fuente rica en nutrientes de péptidos y aminoácidos esenciales para el metabolismo celular.
La célula utiliza estos aminoácidos y péptidos, y se multiplica, lo que da como resultado un crecimiento excesivo que respalda un mayor rendimiento de anticuerpos.
La expresión de genes en las células impulsa la producción de polipéptidos de cadena pesada y ligera.
En el retículo endoplásmico, estas cadenas se pliegan y dimerizan a través de enlaces disulfuro entre cadenas, formando anticuerpos terapéuticos.
En el aparato de Golgi, los anticuerpos sufren modificaciones postraduccionales. Luego se empaquetan en vesículas y se liberan en el medio.
Incube las células durante más tiempo para aumentar la producción de anticuerpos.
A medida que la viabilidad celular comienza a disminuir, coseche el sobrenadante.
Filtre el sobrenadante que contiene anticuerpos terapéuticos y guárdelo a una temperatura más baja para su uso posterior.
Células semilla a 2 x 105 células por mililitro en 100 mililitros de medio sin suero en dos matraces. Incube las células a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono a 120 rotaciones por minuto durante 24 horas. Al cultivo suplementado con nutrientes, agregue triptona a una concentración final de 0,5%. Luego, use un medio sin suero para igualar el volumen del cultivo sin suplementos. Incube las células durante siete días más.
A partir del octavo día de cultivo, cuente las células diariamente con un hemocitómetro para controlar la viabilidad celular. Una vez que la viabilidad celular alcanza menos del 80%, cosechar el cultivo por centrifugación a 3.000 veces g durante 15 minutos. Luego, esterilice el sobrenadante a través de un filtro de 0,22 micrómetros. Almacene los sobrenadantes a 4 grados Celsius a corto plazo o congele a grados Celsius a largo plazo.