Una técnica de cromatografía de afinidad para la purificación de anticuerpos monoclonales

Tome una columna de cromatografía de afinidad que contenga perlas de agarosa conjugadas con la proteína A, una proteína de unión a anticuerpos.

Agregue un tampón de unión con un pH neutro para equilibrar la columna.

Cargue el sobrenadante de cultivo de un cultivo celular productor de anticuerpos, que contenga anticuerpos monoclonales y proteínas celulares contaminantes.

El pH neutro facilita la unión de la proteína A a la región Fc de los anticuerpos mientras fluyen los contaminantes.

Mida la absorbancia UV del flujo para crear un cromatograma. Una alta absorbancia durante la carga de la muestra indica proteínas no unidas en el flujo.

Lave la columna con el tampón aglutinante para eliminar los contaminantes no ligados específicamente.

Agregue un tampón de elución con un pH bajo para interrumpir la interacción entre la proteína A y el anticuerpo. Recolecte los anticuerpos eluidos monitoreando el pico de absorbancia.

Neutralice el pH para evitar la degradación de los anticuerpos y transfiéralo a un filtro centrífugo.

Centrifugar para concentrar los anticuerpos y volver a suspenderlos en un tampón para ensayos posteriores.

Después de preparar los búferes e inicializar el sistema FPLC