Una técnica de tinción de inmunofluorescencia para detectar la neurogénesis del hipocampo adulto

Tomemos una sección del cerebro murino que consiste en la circunvolución dentada del hipocampo, un sitio para la neurogénesis compuesto por progenitores neuronales en distintas etapas de diferenciación.

Transfiera la sección a una solución que bloquee la permeabilización. Las moléculas de detergente en la solución permeabilizan las células, mientras que las proteínas bloquean los sitios de unión no específicos.

Agregue un cóctel de anticuerpos primarios dirigido a marcadores de neurogénesis específicos, una proteína asociada a microtúbulos y una proteína de filamento intermedio.

Retire los anticuerpos no unidos. Introducir diferentes anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo que se unen a los anticuerpos primarios.

Agregue proteínas séricas del mismo huésped como uno de los anticuerpos primarios, saturando los paratopos en los anticuerpos secundarios.

Introducir fragmentos monovalentes de Fab que saturan los epítopos de las proteínas séricas, evitando la unión inespecífica.

Agregue un segundo anticuerpo primario criado en el mismo huésped, uniéndose a otra proteína de filamento intermedia.

Introducir anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo dirigidos al segundo anticue