Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:09 min. • July 8th, 2025
Tomemos la criosección de una biopsia de piel de un paciente con enfermedad de Parkinson encerrada en un medio de inclusión.
El tejido comprende una epidermis más externa, una dermis subyacente y grasa subcutánea inervada por nervios.
Lave la sección para eliminar el medio de inclusión. Transfiéralo a una solución bloqueadora de permeabilización, permeabilizando las células y bloqueando los sitios de unión no específicos.
Sumerja la sección en un cóctel de anticuerpos primarios para lograr un etiquetado uniforme de anticuerpos, denominado tinción flotante.
Los anticuerpos ingresan a las neuronas y se unen a los agregados de alfa-sinucleína distribuidos a lo largo de los axones, una forma agregada característica de las enfermedades neurodegenerativas, y las carboxilas terminales.
Introducir anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos que se unan a los anticuerpos primarios.
Tratar con un tinte de unión al ADN fluorescente que tiñe el núcleo.
Coloque el pañuelo en un portaobjetos, aplique un medio de montaje y selle con un cubreobjetos.
Bajo un microscopio confocal, la fluorescencia de ambos anticuerpos revela la presencia de agregados de alfa-sinucleína a lo largo de los axon
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