Una detección basada en matrices de péptidos de aloanticuerpos HLA antidonantes en receptores de órganos

Tome una matriz de péptidos derivada del antígeno leucocitario humano de un donante de órganos o de la secuencia HLA que comprende diferentes péptidos en la membrana de celulosa.

Cada péptido lleva al menos un desajuste de aminoácidos entre la secuencia HLA del donante y el receptor, lo que representa un epítopo potencial para el rechazo de órganos mediado por anticuerpos.

Tratar con un tampón de bloqueo para evitar la interacción inespecífica de anticuerpos.

Agregue suero receptor recolectado después del trasplante de órganos, que contiene aloanticuerpos.

Estos anticuerpos, formados contra el HLA del donante, se unen a su epítopo diana.

Agregue un anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa que se una al aloanticuerpo.

Agregue sustrato quimioluminiscente y peróxido de hidrógeno. La peroxidasa utiliza peróxido de hidrógeno para oxidar el sustrato, emitiendo luz.

Escanee la membrana para obtener una imagen.

Agregue un tampón para eliminar los anticuerpos unidos. Vuelva a sondear con suero receptor pretrasplante y obtenga una imagen.

En comparación con la imagen previa al trasplante, las manchas oscuras en la imagen posterior al trasplante indican epítopos HLA específicos del dona