Un ensayo de captación de anticuerpos para la obtención de imágenes de la señalización Notch/DeltaD en los progenitores de la glía radial del pez cebra

Coloque una placa de cultivo con embriones de pez cebra descorionados incrustados en agarosa sobre una platina de microscopio.

Tome una solución de colorante que contenga una baja concentración de conjugados de anticuerpos, que lleve un anticuerpo marcado con fluorescencia roja y un anticuerpo anti-DeltaD.

Inyecte la solución de tinte en el ventrículo del rombencéfalo del embrión, apuntando activamente a los progenitores de la glía radial o RGP que se dividen activamente.

Libere el embrión incrustado y recupérelo en un medio rico en nutrientes.

Durante la recuperación, los conjugados fluorescentes interactúan con algunas moléculas DeltaD del ligando Notch en RGP, iniciando la internalización y la formación de endosomas.

La baja concentración de conjugados permite que los ligandos DeltaD no unidos interactúen con el receptor Notch, activando la vía de señalización Notch en RGP.

Después de la recuperación, transfiera un embrión anestesiado con agarosa a un plato de vidrio con su lado dorsal hacia abajo para obtener imágenes.

Realice imágenes de fluorescencia de lapso de tiempo para capturar la división celular, que muestra una partición asimétrica de endosomas fluorescentes que conti