Inmunotinción de células encapsuladas en un sistema de hidrogel 3D

Tome una placa de pocillos múltiples que contenga células de mamíferos encapsuladas en un sistema de hidrogel que imite el entorno natural de la matriz extracelular.

Retire el medio de cultivo. Tratar con un tampón de fijación para reticular las proteínas, preservando la integridad celular.

Agregue una solución que contenga detergente para permeabilizar la membrana celular.

Introducir una solución de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos inespecíficos en los pasos posteriores.

Agregue un cóctel de anticuerpos primarios que ingrese a las células y se una específicamente a los filamentos intermedios citoplasmáticos y al factor de transcripción objetivo.

Retire los anticuerpos no unidos. Introduzca anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia y una tinción nuclear para marcar el ADN de forma fluorescente.

Retire las moléculas sueltas.

Monte el cultivo de hidrogel en un portaobjetos utilizando un medio de montaje.

Utilice un microscopio confocal para observar las células inmunoteñidas.

Primero, aspira el medio de cada pocillo. Luego, lave los pocillos con 1 mililitro de DPBS tibio. Una vez completado el lavado, agregue 750 microlitros de solución de fijación a cada pocillo.