Evaluación de la distribución intracelular de conjugados de anticuerpos modificados con péptidos derivados de virus

Comience con células eritroblastas humanas adheridas.

Introducir conjugados de anticuerpos modificados con péptidos derivados del virus. Estos conjugados contienen una secuencia de localización nuclear, o NLS, del virus y un residuo de ácido cólico.

Durante la incubación, los conjugados de anticuerpos interactúan con los receptores de la superficie celular y se internalizan dentro de los endosomas.

El ácido cólico en el conjugado ayuda a escapar del compartimento endosómico, permitiendo la acumulación intracelular, mientras que las proteínas de transporte y NLS facilitan su localización nuclear.

Introduzca tripsina y tampón que contenga EDTA para separar las células y eliminar los conjugados unidos a la superficie.

Agregue medios enriquecidos con suero para inhibir la actividad de la tripsina.

Centrifugar para recoger las células; fijarlas y permeabilizarlas.

Introducir anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo rojo lejano, unirse a conjugados localizados y lavar.

Tratar con un tinte nuclear.

Observe bajo un microscopio confocal y capture imágenes a varias profundidades planas.

Después del procesamiento de imágenes, la célula muestra pequeños focos fluorescentes verdes dentro