Infusión controlada de anticuerpos específicos del péptido Aβ y oligómeros Aβ en el hipocampo de la rata

Tome una rata despierta con dos cánulas guía implantadas bilateralmente en el hipocampo.

Las cánulas están conectadas a bombas osmóticas implantadas por vía subcutánea que contienen anticuerpos beta-amiloide o Aβ específicos y de control, respectivamente.

Una alta concentración de anticuerpos dentro de la bomba induce la difusión de agua desde el tejido circundante a través de su membrana semipermeable externa, expandiendo la capa osmótica.

Esta expansión comprime el depósito de anticuerpos, lo que facilita la liberación controlada de anticuerpos.

Conecte dos cánulas internas a catéteres llenos de agua estéril conectados a una bomba de infusión.

Llena las cánulas con agua.

A continuación, aspire un pequeño volumen de aire, creando una burbuja.

Ahora, llene las cánulas con oligómeros neurotóxicos de Aβ, agregados solubles de péptidos Aβ.

Inserte las cánulas internas en las cánulas guía. Ponga en marcha la bomba para una administración controlada de los oligómeros, utilizando la burbuja de aire para evitar el reflujo y realizar un seguimiento de la velocidad de infusión.

Administre inyecciones repetidas de oligómeros durante el tiempo requerido.

El modelo está listo para estudiar las interacciones entre oligómeros y anticuerpos Aβ.

Un día antes de la instalación, llene las bombas osmóticas con el anticuerpo 6E10 o controle el anticuerpo IgG1 de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Coloque las bombas en agua destilada estéril y manténgalas a 37 grados centígrados durante la noche para activar las bombas.

Una vez anestesiada la rata con isoflurano al 3% y afeitada entre los omóplatos, desinfecte la piel con una solución de gluconato de clorhexidina al 2% y alcohol isopropílico al 2%. Después de realizar una incisión de 2 centímetros con un bisturí entre los omóplatos, ubique los catéteres PE-50 conectados a la cánula guía.

A continuación, corte los extremos de los catéteres PE-50 que contienen cemento dental con un bisturí. Conecte las bombas osmóticas a los catéteres PE-50 y agregue un poco de cemento dental en la unión de la bomba y el catéter para asegurar la conexión. Finalmente, cose la piel firmemente con suturas 4/0. Vuelva a colocar al animal en su jaula sobre una almohadilla térmica tibia y vigílelo cuando se despierte de la anestesia con isoflurano.

Después de preparar la solución de oligómero de beta amiloide como se informó anteriormente, deje que la solución se agregue de forma dinámica y espontánea durante 1 hora a temperatura ambiente antes de la infusión. Luego, llene cada jeringa con 5 microlitros de agua destilada estéril.

A continuación, corte dos catéteres PE-50 a unos 60 centímetros de longitud con un bisturí. Use dos jeringas de 1 mililitro equipadas con agujas de calibre 21 para llenar ambos catéteres con agua destilada estéril. Mientras las jeringas de 1 mililitro permanecen en su lugar, en un extremo de cada catéter, conecte los extremos libres a las jeringas Hamilton. Retire las jeringas de 1 mililitro y verifique que no haya burbujas de aire en los catéteres.

Inserte la cánula interna en el extremo de los catéteres PE-50. Use las jeringas Hamilton para llenar cada cánula interna hasta 1 microlitro, luego, haga una burbuja de aire tirando del pistón hacia atrás hasta la marca de 2 microlitros.

Ahora mezcle la solución de oligómero de beta amiloide pipeteando hacia arriba y hacia abajo con una punta de mínima adherencia. Evite formar burbujas durante la mezcla. Luego, llene ambas cánulas internas con 1,5 microlitros de solución de oligómero beta-amiloide tirando de los pistones hacia atrás a 3,5 microlitros.

A continuación, marque las líneas antes y después de la burbuja de aire en ambos catéteres. Esto sirve como un punto de control de la infusión continua. Coloque a la rata despierta en un acurrucamiento e inmovilice su cabeza. Retire la cánula falsa de la cánula de dos guías, luego inserte la cánula interna previamente preparada en la cánula guía. Verifique que estén completamente insertados y bien fijados a la base de la cánula guía. Ahora, libere a la rata de la sujeción para acurrucarse y vuelva a colocarla en su jaula para limitar el estrés de manejo.

Encienda la bomba de infusión e inyecte 1 microlitro de solución de oligómero de beta amiloide a una velocidad de 0,1 microlitros por minuto. Durante la infusión, verifique que el pistón de la jeringa se mueva de 3,5 microlitros a 2,5 microlitros, y que las burbujas de aire en ambos catéteres PE-50 se muevan continuamente. Revise la rata para asegurarse de que los catéteres no se tuerzan juntos.

Deje la cánula interna en su lugar durante otros 5 minutos después de la infusión para permitir una difusión eficiente de la solución de oligómero de beta amiloide. Después de la infusión, vuelva a colocar a la rata en la posición de acurrucarse y retire la cánula interna y la cánula de guía tapada para evitar el reflujo de la solución inyectada. Coloque una cánula ficticia que se detuvo justo antes del brazo angular de la cánula guía. Finalmente, regrese al animal a su jaula.