Detección y medición de péptidos diana mediante un biosensor de inmunosonda capacitiva

Comience con un alambre de platino recubierto de perfluoroalcoxi ensamblado con una capa de polidopamina.

Remoje esta sonda en una solución que contenga anticuerpos específicos del péptido diana, que se inmovilizan en la polidopamina, formando una inmunosonda.

Lave y coloque la inmunosonda en una cámara de flujo con un electrodo de tierra de cloruro de plata, estableciendo un circuito.

Primero, introduce el tampón y aplica un voltaje para activar la inmunosonda, lo que le permite funcionar como una batería o condensador, almacenando energía como una carga eléctrica.

Registre la señal eléctrica para generar la línea de base.

Ahora, exponga el biosensor a una solución que contenga los péptidos diana.

Estos péptidos se unen a los anticuerpos de la sonda, provocando una alteración en la carga local y la energía almacenada en el biosensor.

Registre la señal eléctrica. Un aumento en la señal indica la presencia del péptido diana, mientras que la magnitud de esta señal se correlaciona con la concentración del péptido diana.

Primero, corte una longitud de 25 centímetros de alambre de platino recubierto de perfluoroalcoxi. Luego, con un bisturí, pele aproximadamente 5 milímetros de recubrimiento de perfluoroalcoxi de un extremo, con cuidado de no cortar el alambre de platino. Ahora, inserte el extremo pelado del cable de platino en un pin de conector macho de 1 milímetro chapado en oro. Luego, con unos alicates de punta fina, engarce los dientes del pasador del conector alrededor del extremo pelado del cable de platino y suelde el cable de platino al pasador del conector chapado en oro.

A continuación, prepare la solución de dopamina agregando 50 miligramos de clorhidrato de dopamina en 50 mililitros de PBS de 10 milimolares, con pH 6, y mezcle agitando. Después de disolver completamente la dopamina, coloque la punta del alambre de platino en el recipiente que contiene el PBS recién hecho suplementado con dopamina. Conecte el electrodo de disco de cloruro de plata al canal de tierra en la etapa de cabeza. Luego, coloque el disco de cloruro de plata en el recipiente que contiene PBS suplementado con dopamina y alambre de platino.

Antes de continuar, conecte una derivación de cable a los canales de referencia de la etapa principal. Abra el software interactivo de adquisición de datos y configure un protocolo de potencial de comando de electrodeposición de diente de sierra configurando el potencial de inicio en menos 0,6 voltios, el potencial final en 0,65 voltios, la velocidad de escaneo en 0,04 voltios por segundo y la duración de la deposición en 420 segundos.

Después de completar la deposición de polidopamina, retire el gránulo molido de cloruro de plata y la punta del alambre de platino del recipiente. Coloque la punta del alambre en un microtubo que contenga PBS de pH 7.4 durante 2 a 5 minutos y asegúrese de que la punta del alambre no entre en contacto con los lados o la parte inferior del microtubo. Luego, prepare la solución de anticuerpos combinando el anticuerpo de interés con el PBS de pH 7.4, en una proporción de 1 a 20, en un recipiente de tamaño apropiado.

A continuación, sumerja la punta depositada en polidopamina del electrodo de platino en solución de anticuerpos durante dos horas a temperatura ambiente, asegurándose de que la punta del alambre de platino quede suspendida en solución y no descanse sobre la superficie interior del microtubo. Coloque la punta funcional de la inmunosonda capacitiva en la cámara de flujo, teniendo cuidado de no alterar la punta del electrodo de ninguna manera, ya que hacerlo puede dañar la punta sensorial de la sonda.

Antes de la primera prueba experimental, realice una ejecución estándar de TBS para acondicionar la inmunosonda capacitiva y, para el protocolo de voltaje, establezca el potencial de paso positivo en 110 milivoltios, el potencial de paso negativo en menos 5 milivoltios, la duración del paso de 20 milisegundos y la duración de la adquisición en 600 segundos.

A continuación, cree la solución peptídica de interés, utilizando el mismo TBS. Para mantener la composición del superfusato, configure un sistema de colector en el que el superfusato se pueda cambiar entre TBS y TBS suplementado con péptidos. Utilice los parámetros estándar de TBS y configure el protocolo de adquisición de datos de detección de péptidos estableciendo la duración de la adquisición en 360 segundos.