Una técnica in vitro para estudiar el tráfico de receptores de glutamato en las neuronas del hipocampo
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:27 min. • July 8th, 2025
Tome tres muestras de cultivos neuronales del hipocampo en cubreobjetos.
Introducir anticuerpos primarios para marcar los receptores de glutamato expresados en la superficie.
Agregue un medio acondicionado a la segunda y tercera muestras para inducir la endocitosis de los receptores unidos a anticuerpos.
En la tercera muestra, agregue fragmentos de Fab para bloquear los epítopos en los anticuerpos no endocitosados.
Introducir un inhibidor para bloquear la endocitosis del receptor mientras permite el reciclaje del receptor a la superficie.
En todas las muestras, fije las células y agregue una solución de bloqueo para evitar el etiquetado no específico.
Introducir anticuerpos secundarios marcados con fluoróforos para marcar los anticuerpos primarios en los receptores unidos a la superficie, incluidos los reciclados.
Permeabiliza las membranas celulares.
Agregue el anticuerpo primario nuevamente a la primera muestra para etiquetar los receptores endocitosados preexistentes.
Introduzca un anticuerpo secundario diferente marcado con fluoróforo en todas las muestras para etiquetar los anticuerpos primarios unidos al receptor endocitosado, distinguiendo entre receptores endocitados y unid
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