Un ensayo in vitro para medir la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos por fagocitos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:03 min. • July 8th, 2025
Tome microesferas marcadas con fluorescencia conjugadas con un antígeno de interés. Los antígenos inmovilizados se unen a anticuerpos específicos de antígeno.
Agregue leucocitos, incluidos linfocitos no fagocíticos, granulocitos fagocíticos y monocitos. Incubar la mezcla en condiciones fisiológicas.
La región Fc del anticuerpo inmovilizado se une al receptor Fc en el fagocitos, desencadenando la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos o ADCP.
Centrifugar para granular las células y desechar el sobrenadante que contiene microesferas no internalizadas.
Agregue una tinción de viabilidad que ingrese a las células muertas, etiquetándolas con fluorescencia.
Centrifugar para granular las células y eliminar el sobrenadante.
Agregue anticuerpos marcados con fluorescencia que se unan a los leucocitos.
Centrifugar para desechar el sobrenadante y fijar las células.
Usando citometría de flujo, primero, elimine las células muertas que son positivas para la tinción de viabilidad.
Luego, seleccione los leucocitos viables y discrimine entre granulocitos, monocitos y linfocitos en función de su granularidad y propiedades de dispersión.
Mida la intensidad de fluorescencia de las células fagocí
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