Un ensayo in vivo para detectar mitofagia en nematodos transgénicos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:39 min. • July 8th, 2025
Tomemos los nematodos transgénicos, con células musculares de la pared del cuerpo que expresan DCT-1 marcado con fluoróforo verde, una proteína de la membrana mitocondrial externa, y un LGG-1 marcado con fluoróforo rojo, una proteína de membrana de fagóforo.
Coloque los gusanos encima de un medio de crecimiento que contenga un fármaco inductor de mitofagia.
El fármaco daña las mitocondrias celulares, iniciando la mitofagia o la eliminación selectiva de las mitocondrias dañadas.
DCT-1 en las mitocondrias dañadas sufre ubiquitinación y fosforilación, lo que facilita la interacción con LGG-1 en la membrana del fagóforo.
El fagóforo se expande alrededor de las mitocondrias para formar un autofagosoma destinado a la degradación lisosomal.
Coloque los nematodos en un anestésico en un portaobjetos de microscopio para inmovilizarlos y coloque un cubreobjetos.
Bajo un microscopio de fluorescencia, visualice manchas amarillas dentro de las células musculares, lo que indica la colocalización de DCT-1 que emite fluorescencia verde y LGG-1 que muestra fluorescencia roja. Esto confirma la aparición de mitofagia.
El primer día, recoja larvas L4 de animales transgénicos que expresen DCT-1::GFP y D
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