Imágenes de inmunofluorescencia multiplexadas para analizar subpoblaciones de células T resistentes a la inmunoterapia

Tome una criosección de tejido de carcinoma de células renales que exhibe células T CD8+ infiltrantes en su microambiente tumoral.

Trátelo con acetona para fijar y permeabilizar el tejido. Lavar para eliminar el exceso de acetona.

Agregue avidina para saturar la biotina del tejido endógeno. A continuación, agregue biotina para bloquear los sitios de unión de avidina inmovilizados, minimizando las interacciones no específicas.

Aplicar suero que contenga inmunoglobulinas para bloquear los receptores Fc de las células inmunitarias, evitando la unión inespecífica de anticuerpos.

Agregue un cóctel de anticuerpos primarios dirigido a CD8, un marcador de células T citotóxicas, y PD-1 y Tim-3, receptores inhibidores expresados por subpoblaciones de células T CD8+ resistentes a la inmunoterapia.

Introducir distintos anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo dirigidos a anticuerpos anti-CD8 y anti-Tim-3.

Agregue anticuerpos secundarios biotinilados dirigidos a anticuerpos anti-PD-1 y una estreptavidina marcada con fluoróforo diferente que se une a la biotina.

Aplique un medio de montaje que contenga colorante para teñir los núcleos celulares y coloque un cubreobjetos.

Adquiera imágenes