Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:19 min. • July 8th, 2025
Comience con un portaobjetos que contenga células huésped adheridas.
Agregue virus y déjelos ingresar a las células huésped.
Retire el medio gastado. Agregue medio fresco para permitir la síntesis y el transporte de proteínas virales.
Use paraformaldehído para preservar la morfología celular y la ubicación de las proteínas.
Agregue moléculas de detergente para hacer que las células sean permeables.
Aplique un búfer de bloqueo para bloquear sitios de enlace que no sean de destino.
Agregue anticuerpos primarios que se unan a las proteínas virales objetivo. Eliminar los anticuerpos no unidos.
Superposición con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforo rojo para marcar fluorescentemente las proteínas virales. Eliminar los anticuerpos no unidos.
Agregue un medio de montaje que contenga un tinte nuclear fluorescente para teñir los núcleos.
Usando microscopía confocal, observe la ubicación de las proteínas virales fluorescentes rojas y los núcleos del huésped fluorescentes azules.
Una señal roja más fuerte alrededor del área azul indica localización citoplasmática, mientras que una señal más fuerte en el interior sugiere localización nuclear.
Los niveles de señal iguales en y alre
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