Un método in vitro para identificar células inmunitarias innatas y adaptativas que residen en pulmones murinos

Tome tejido pulmonar murino picado en un tampón de digestión e incube a una temperatura fisiológica.

Las enzimas amortiguadoras descomponen la matriz del tejido, aflojando las células.

Triture para disociar la masa celular y filtre la suspensión con un colador para aislar las células individuales.

Centrifugar para eliminar el sobrenadante con restos de tejido. Incube las células con un tampón de lisis para lisar los glóbulos rojos.

Centrifugar para desechar el sobrenadante que contiene restos celulares. Vuelva a suspender las células y transfiéralas a una microplaca.

Agregue anticuerpos para bloquear los receptores Fc, evitando la tinción de fondo.

Introducir un cóctel de anticuerpos marcado con fluoróforo dirigido a marcadores de superficie específicos en las células inmunitarias innatas (monocitos, macrófagos, células dendríticas, células asesinas naturales, neutrófilos, eosinófilos y células inmunitarias adaptativas: linfocitos B y T).

Fijar y permeabilizar las células. Agregue anticuerpos marcados con fluoróforo específicos para un marcador intracelular en monocitos, macrófagos, células dendríticas y eosinófilos.

Usando citometría de flujo, clasifique las células inmunes marcad