Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:50 min. • January 15th, 2026
Comience con un tubo que contenga neutrófilos. Agregue un tampón que contenga un inhibidor de la proteinasa para evitar la degradación de las proteínas.
Añadir un detergente adecuado para permeabilizar la membrana neutrófila
En un baño de hielo, sonique la muestra con ondas sonoras de alta frecuencia para alterar la membrana celular, liberando contenido intracelular, incluidas varias proteínas.
Centrifugar brevemente para recoger el contenido de las paredes del tubo y transferirlo a un tubo adecuado.
Introduzca un agente reductor e incube a alta temperatura para promover la escisión del enlace disulfuro, lo que hace que las proteínas se desnaturalicen.
Enfríe e introduzca un reactivo alquilante que alquile los grupos sulfhidrilo.
Agregue acetona fría para inducir la precipitación de proteínas.
Centrifugar para granular las proteínas y los fragmentos celulares. Retire el sobrenadante y seque al aire.
Introducir un tampón que contenga un agente desnaturalizante y sonicar para volver a solubilizar el gránulo de proteína.
Finalmente, agregue una mezcla de proteasa que escinda las proteínas. Almacene la muestra para su posterior procesamiento.
Para comenzar, recolecte las células HL60 d
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