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Inmunología
0 vistas • 4:42 min • January 15th, 2026
Tome una gota de orina fresca de ratón y sumerja una tira de detección de glucosa que contenga glucosa oxidasa, peroxidasa y cromógeno.
La glucosa oxidasa oxida la glucosa en la orina, formando gluconolactona y peróxido de hidrógeno.
Además, la peroxidasa utiliza peróxido de hidrógeno para catalizar la oxidación del cromógeno, formando un producto coloreado, con una intensidad proporcional a la concentración de glucosa en la orina.
Compare el color con la tabla de referencia de la tira para la evaluación cualitativa de la glucosa en la orina.
Para la medición cuantitativa de la glucosa en orina, tome una placa de varios pocillos con estándares de concentración de glucosa y la muestra de orina de ratón recolectada durante un período definido.
Agregue una mezcla de ensayo que contenga glucosa oxidasa, peroxidasa y reactivos de acoplamiento indicador.
La glucosa oxidasa facilita la oxidación de la glucosa, formando gluconolactona y peróxido de hidrógeno. La peroxidasa cataliza la reacción entre los reactivos de acoplamiento y el peróxido de hidrógeno, formando un producto de color rosa.
Con un lector de microplacas, mida la absorbancia del producto coloreado.
Con la curva estándar de glucosa generada, determine la concentración de glucosa en la orina.
Comience colocando un trozo de parafilm limpio sobre una superficie plana. Levante suavemente el ratón por la cola y colóquelo en el parafilm.
Sujete al ratón por el cogote con el pulgar y el índice, haciendo que el ratón orine como respuesta al estrés. Deje que una gota de orina caiga sobre la superficie del parafilm y luego regrese al ratón a su jaula.
Sumerja el extremo del reactivo de una tira de detección de glucosa en la gota de orina fresca. Retire inmediatamente la tira y colóquela plana sobre una superficie con el lado del color hacia arriba. Luego, espere al menos 30 segundos para que se desarrolle completamente un color en la tira. Compare el color desarrollado con la tabla de referencia proporcionada por el fabricante.
Ensamble la jaula metabólica de acuerdo con las instrucciones del fabricante y llene el conjunto de alimentación con comida en polvo, luego, conéctelo a la lengüeta de metal correspondiente en la cámara superior.
Asegure el soporte de la botella de agua a la lengüeta metálica restante en la cámara superior. Llene la botella de agua vacía y deslícela en el soporte de la botella, asegurándose de que el tubo del sorbo esté en el orificio.
Coloque un solo ratón en la jaula metabólica y cúbrala con la tapa, asegurándose de que la tapa de la jaula esté bien colocada. Coloque el tubo de recolección de orina y el tubo de recolección de heces en sus respectivos lugares en el piso de la cámara inferior.
Después de 24 horas, recupere el tubo de recolección de orina y realice un ensayo de glucosa para determinar la concentración de glucosa en orina. Si el ensayo de glucosa no se realizará el mismo día, congele la muestra de orina en un congelador de menos 80 grados centígrados.
Si usa una muestra de orina congelada, descongélela primero. Prepare ocho estándares que van de 25 a 0 miligramos por decilitro, de acuerdo con las instrucciones del kit de ensayo.
Prepare pocillos estándar y pocillos de muestra de orina en una placa de 96 pocillos, todos por duplicado, de acuerdo con el manual del kit. Inicie la reacción agregando la cantidad recomendada de mezcla de enzimas a todos los pocillos. Cubra el plato y déjelo incubar durante 10 minutos a 37 grados centígrados. Luego, lea la absorbancia a 500 a 520 nanómetros usando un lector de placas.
Analice los datos de acuerdo con las instrucciones del kit de ensayo y grafique la absorbancia de cada estándar frente a la concentración de glucosa. Utilice este gráfico para determinar la concentración de glucosa de la muestra de orina de 24 horas. Si la concentración de la orina está fuera del rango estándar, diluya la muestra de orina.