Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:34 min. • July 8th, 2025
Comience con células de mamíferos infectadas por virus que producen múltiples caspasas, incluida la caspasa-3.
Agregue un medio de crecimiento al pocillo de control y un medio suplementado con inhibidor de caspasa-3 al pocillo de prueba.
En el pozo de control, la caspasa-3 reconoce y degrada las nucleoproteínas virales y las proteínas del huésped esenciales para la propagación viral.
En el pozo de prueba, el inhibidor ingresa a la célula, inhibiendo la actividad de la caspasa-3 y evitando la degradación de la proteína.
Desaloje las células de la placa. Agregue un reactivo de lisis y caliente para inducir la lisis celular, liberando proteínas intracelulares.
Cargue ambas muestras en un gel de poliacrilamida SDS y electroforesa para separar las proteínas según el tamaño.
Después de la electroforesis, transfiera el gel a una membrana secante.
Tratar la membrana con anticuerpos primarios contra las nucleoproteínas virales y las proteínas del huésped.
Lavar y recubrir con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos que se unen a anticuerpos primarios, generando bandas fluorescentes.
La mayor fluorescencia en la muestra de prueba indica una reducción de la escisión de la proteína
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