Ensayo para medir la acumulación de una sonda antibiótica fluorescente en células bacterianas
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:02 min. • July 8th, 2025
Tome tubos de ensayo que contengan muestras bacterianas.
En la muestra de prueba, agregue moléculas inhibidoras para bloquear la bomba de salida de antibióticos de las bacterias.
Centrifugar y desechar el sobrenadante.
Agregue sondas de antibióticos conjugadas con fluoróforos que ingresan a las células bacterianas.
En la muestra de control, la bomba de salida extruye las sondas en el medio extracelular.
En la muestra tratada con inhibidor, la bomba de salida bloqueada no puede expulsar las sondas, lo que provoca su acumulación.
Centrifugar las muestras. Deseche el sobrenadante que contiene sondas extracelulares.
Agregue tampón de lisis seguido de lisozima para debilitar la pared celular bacteriana.
Realice ciclos de congelación y descongelación, sonicación y exposición a altas temperaturas para lisar las células.
centrífuga. Transfiera el sobrenadante a una membrana filtrante.
Lave y recoja el filtrado que contiene las sondas.
Mida la intensidad de fluorescencia del filtrado.
Una mayor intensidad de fluorescencia en las muestras bacterianas tratadas con inhibidores sugiere una pérdida de la función de salida, lo que lleva a la acumulación de sondas intracelulares.
Para el análisis
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