Contracción de la arteria mesentérica y Estudios de relajación con miografía cable automático

Este procedimiento utiliza ratas sensibles a la sal y resistentes a la sal para comparar la reactividad de las arterias de resistencia mesentérica bajo tensión de fenilefrina con el calcio extracelular. Esto se logra primero aislando la arcada mesentérica de los animales y diseccionando las ramas de las arterias de resistencia. Próximo. El primero de los dos alambres de acero inoxidable se enhebra a través de un segmento corto de la arteria disecada y el vaso se monta en la cámara del grafo.

Luego, el segundo alambre de acero inoxidable se enhebra a través del lumen del recipiente paralelo al primer cable. A continuación, el vaso montado se estira hasta una circunferencia interna normalizada. El paso final del procedimiento es reactivar el vaso desafiándolo con aplicaciones repetidas de fenilefrina y relajándolo con aplicaciones acumulativas de calcio.

En última instancia, los resultados muestran cambios en la tensión en el vaso, que se pueden convertir en una curva de respuesta de calcio y utilizar para determinar los valores de EC 50. A modo de comparación. La primera vez que tuvimos la idea de usar este método fue cuando descubrimos que la red nev de baterías de mampostería para ratas expresaba un receptor de calcio y cobre gpro.

Eso se puede estudiar de la misma manera que los receptores AIC amargos, que se activan mediante agonistas. Por lo general, las personas nuevas en este método pueden tener dificultades porque las capas de endotelio y músculo liso son pequeñas. Las embarcaciones se dañan fácilmente.

Si esto ocurre, las propiedades mecánicas de estos recipientes pueden verse comprometidas. Para comenzar, prepare el área de trabajo y el instrumental quirúrgico. Coloque un animal anestesiado en su lomo y limpie el abdomen con alcohol.

Después de realizar una laparotomía de línea media, use tijeras para extirpar unos 85 centímetros de intestino, incluida la arteria mesentérica superior. Corta el extremo proximal cerca del píloro y el extremo distal cerca de la unión ileocecal. Coloque la sección extirpada en una placa de Petri recubierta que contenga una solución salina fisiológica o PSS a temperatura ambiente.

Sujete el extremo proximal del intestino hacia la derecha y luego sujete el resto del intestino en sentido contrario a las agujas del reloj. A continuación, diseccione un segmento de la arteria mesentérica que contiene las ramas dos y tres y un trozo del intestino desde el extremo proximal. Identifique el punto de ramificación en forma de V de la arteria mesentérica y diseccione lejos de la vena.

Use fórceps para separar suavemente el tejido adiposo y conectivo para evitar el contacto directo con la arteria. Para comenzar a montar el recipiente, corte dos segmentos de arteria de unos dos milímetros de largo. La punta de un alambre de acero inoxidable sin tungsteno de cuatro centímetros y 40 micrómetros se puede usar para abrir el lumen de la arteria.

Luego, use pinzas finas para insertar el alambre en el lumen de cada arteria. Teniendo cuidado de no dañar el endotelio, llene la cámara de mioinjerto con PSS a 37 grados centígrados. Use pinzas para transferir el segmento del vaso roscado a la cámara.

A continuación, transfiera el segmento del vaso proximal extirpado a la cámara del miografo y tire del extremo a lo largo del alambre para introducirlo en el vaso. Evite estirar el vaso. Asegure el extremo cercano del cable en sentido contrario a las agujas del reloj debajo del tornillo de fijación cercano en la mordaza derecha conectada al micrómetro.

Sujete el extremo libre del alambre con pinzas y asegúrelo en el sentido de las agujas del reloj debajo del tornillo de fijación lejano en la mordaza derecha, asegúrese de que el segmento del vaso a lo largo del alambre esté situado en el espacio entre las mordazas sin hacer ningún contacto con la mordaza misma. Enrosca las mordazas. Alinee el segundo cable en paralelo con el vaso e insértelo en el extremo más alejado del lumen.

Pase suavemente el cable a través del lumen del segmento del vaso en un solo movimiento utilizando el cable ya montado como guía. Sostenga el alambre a aproximadamente un centímetro del vaso para evitar estirarlo durante la maniobra y evitar tocar el endotelio. Atornille las mordazas y asegúrese de que el segundo cable de montaje se mueva por debajo del primero asegurado en la mano derecha.

La mordaza asegura el extremo cercano del segundo cable en el sentido de las agujas del reloj debajo del tornillo de fijación cercano de la mordaza izquierda conectada al transductor. Asegure el extremo más alejado del cable debajo del tornillo de fijación en la mordaza izquierda y apriételo para estirar el cable. Una vez completado el montaje, espere 30 minutos para el equilibrio a 37 grados centígrados.

Después del equilibrio, el motor se restablece desde el menú de montaje y se inicia el procedimiento de normalización, que estira el recipiente a una circunferencia interna normalizada. Para comenzar, abra el menú de normalización y establezca la presión transmural objetivo en 13,3 kilopascales. A continuación, establezca la duración de cada uno de los pasos de normalización en 60 segundos.

La proporción de IC uno a IC 100 debe ser igual a 0,9 y la calibración IP debe establecerse en dos estrellas delta. Mida la longitud de la arteria mesentérica montada utilizando las lecturas del ocular del microscopio cuando las líneas del cabello están sobre el extremo y las neuronas del segmento del vaso. Después de la normalización, los vasos se reactivan mediante la realización de un inicio estándar que consiste en una serie de estimulaciones y períodos de lavado.

Primero, reemplace la tapa de la cámara myo e inicie la aireación con 95% de aire y 5% de dióxido de carbono. Llene la cámara con PSS fresco que contenga 100 micromolares de ácido ascórbico. Contraer el recipiente con cinco micromolares de hinojo, rine o PE durante cinco minutos y lavar cuatro veces con tampón PSS Después del último lavado, vuelva a llenar la cámara con PSS y espere tres minutos antes de volver a llenar la cámara con PSS y contraerse con PE.As se muestra anteriormente, la arteria ya está lista para el experimento.

Mida la relajación de los vasos contraídos mediante la adición acumulativa de concentraciones crecientes de cloruro de calcio. Esta tabla muestra que las tensiones basales después de la aplicación de fenilefrina variaron entre las ratas wistar DS o sensibles a la sal de muñeca y las DR o resistentes a la sal de muñeca. Este rastro de una rata wistar muestra la relajación de las arterias contraídas por la EP por adiciones acumulativas de relajación de calcio con un grave compromiso en los tejidos de las ratas DS en comparación con las ratas Wistar y en comparación con las ratas Dr. Como se ve aquí, las diferencias en la sensibilidad al calcio se pueden ver en las curvas de respuesta al calcio y nuevamente al calcular los valores de EC 50.

Por último, las ratas DS muestran una reducción en la expresión del receptor sensor de calcio en las arterias en comparación con las ratas Dr. Esta técnica se puede realizar en dos horas si se realiza correctamente. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo comparar la reactividad vascular de los pequeños atractos entéricos con un compuesto exógeno en condiciones isométricas.