Ratón enucleación del ojo por remoto de alto rendimiento fenotipificación
19 de noviembre de 2011
La técnica de disección ilustra la enucleación del ojo del ratón para la fijación del tejido para realizar el fenotipado de alto rendimiento pantallas.
Este video ilustrará el ojo del ratón y la nucleación o la extracción del globo ocular de la cuenca del ojo. El globo ocular está delimitado por el margen del párpado inferior. Aquí está el canto medial o nasal.
En el dorso se encuentra el canto temporal o lateral. Arriba está el margen superior del párpado. Aquí hay una muestra quirúrgica.
La aguja apunta a la córnea transparente. Podemos ver un poco de la lente asomando más allá del iris. El iris está aquí en marrón, cubriendo la lente.
El punto de referencia quirúrgico más importante es esta línea blanca, o el limbo formará una herida punzante justo detrás de ella. La mitad posterior del globo está detrás del limbo y estamos apuntando a una inserción muscular. Aquí se puede ver el músculo que yace contra el globo, y luego el tejido conectivo que llena la órbita e incluye la glándula aria.
Y finalmente, esta es la larga tira blanca del nervio óptico de una disección roma. Con una pinza de vendaje curva, personalizada con una punta afilada, comience separando los párpados. Esto tiende a mantener el ojo tostado hacia afuera y lejos.
Use con cuidado sus pinzas para entrar en la órbita y detrás del globo ocular, comprimirlas suavemente detrás del globo ocular sin apretarlo y tire hacia adelante. Debería haber sido capaz de agarrar el tejido conectivo y no el globo ocular. Si gira el globo ocular hacia un lado, puede ver el tejido orbital junto con el nervio óptico blanco.
Esta es una segunda disección solo para mostrar que, de nuevo, se entra en el canto, se empujan las pinzas detrás del globo ocular, se agarra el tejido conectivo y se tira de él hacia adelante sin deprimir el globo ocular en sí. De nuevo, se puede ver el tejido conectivo en la larga tira de nervio óptico blanco. Para hacer una herida punzante, agarre el globo ocular por una inserción muscular e inserte una aguja detrás del limbo justo al lado de donde sostiene el ojo para estabilizarlo.
Esto permitirá que el fijador entre en el ojo. Si haces la punción lejos de donde sostienes el ojo, el globo ocular será muy inestable y será difícil hacer esa herida siempre y cuando no compres el ojo o apliques una presión indebida. También puede agarrar todo el tejido conectivo justo detrás del globo ocular.
Algunos fijadores no requieren una herida punzante. En general, colocamos el ojo en un frasco de centelleo de cinco cc con al menos tres cc de fijador para asegurarnos de que el ojo esté sumergido. Para animales fijos de profusión, es necesaria una disección aguda.
Utilizamos unas pinzas calibri curvas y unas tijeras wescott curvas. Sujete el párpado inferior con las pinzas calibri. Inserta las tijeras contra el hueso orbital y comienza a cortar el tejido conectivo.
Usamos la curva lejos del globo ocular y evitamos en el tamaño. Cualquiera de los ojos trabajará a lo largo del margen del párpado inferior de un canto al otro. En un momento dado, se extirpará la mayor parte del tejido conectivo y podrá deslizar las tijeras detrás del globo y tirar de él.
Aquí hay otro ejemplo de nuevo, insertando las tijeras en la órbita, pero contra el hueso orbital en lugar del globo ocular y cortando el tejido conectivo. Esto comenzará a liberar el globo ocular, que es como una pelota de baloncesto en una canasta. Use las pinzas para retraer los párpados y haga cortes cortos suaves alrededor del globo ocular.
Aquí agarramos el tejido conectivo o una inserción muscular con el Collibra y terminamos de cortar el globo ocular del tejido conectivo orbital. Después de que los globos oculares estén convenientemente fijados, y si es necesario transportarlos, colocamos un poco de película para. Nosotros alrededor del frasco de sación.
El embalaje debe estar de acuerdo con las regulaciones universitarias y gubernamentales. Por lo general, los colocamos en un recipiente con un poco de algodón Para atrapar cualquier líquido, este recipiente debe estar sellado muy herméticamente. A continuación, este contenedor de envío se coloca en una bolsa de plástico de burbujas.
Esto se coloca en un paquete de envío de laboratorio de líquidos, junto con cualquier documentación.
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Visión general
Este video ilustra la técnica de enucleación del ojo de ratón, que es crucial para la fijación de tejidos en pantallas de fenotipagen de alto rendimiento. El procedimiento implica la extracción del globo ocular de su órbita, destacando puntos de referencia anatómicos para mayor claridad.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología
Antecedentes
- La enucleación es una técnica crítica en varios estudios biológicos.
- Entender la anatomía del ojo ayuda en procedimientos quirúrgicos precisos.
- Este método es esencial para aplicaciones de screening de alto rendimiento.
- La fijación adecuada del tejido es necesaria para una fenotipagen precisa.
Propósito del estudio
- Demostrar la técnica de enucleación con fines educativos.
- Proporcionar una guía visual para investigadores que realizan procedimientos similares.
- Mejorar la comprensión de los puntos de referencia anatómicos durante la cirugía.
Métodos utilizados
- Demostración en video del proceso de enucleación.
- Identificación de características anatómicas clave del ojo de ratón.
- Guía paso a paso para realizar el procedimiento.
- Ayudas visuales para apoyar el aprendizaje y la aplicación.
Resultados principales
- Visualización clara de la técnica de enucleación.
- Identificación del canto medial y lateral.
- Demostración del espécimen quirúrgico post-enucleación.
- Mejora en la comprensión del procedimiento para pantallas de alto rendimiento.
Conclusiones
- El video sirve como una herramienta educativa efectiva para investigadores.
- Entender el proceso de enucleación es vital para una fijación exitosa de tejidos.
- Una técnica adecuada puede mejorar los resultados en estudios de fenotipagen.
Preguntas frecuentes
Executive Industry Relevance
Remote high-throughput phenotyping of mouse eyes enables distributed genetic resource utilization and accelerates discovery of genotype-phenotype correlations in ophthalmic disease models. Standardized enucleation and tissue transfer protocols reduce geographic and operational barriers, supporting scalable, multi-site preclinical research. This approach enhances portfolio-wide access to rare or geographically dispersed transgenic lines for early-stage target validation and phenotypic screening.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Facilitates systematic collection of ocular tissues from diverse genetic backgrounds for hypothesis-driven studies.
- Enables functional validation of candidate genes implicated in ocular development and disease.
- Supports predictive confidence in linking genetic perturbations to phenotypic outcomes.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, fixed tissue samples suitable for downstream molecular and morphological assays.
- Improves reproducibility and comparability across multi-site phenotyping screens.
- Enables scalable preparation of samples for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Aligns mouse phenotyping with translational biomarker discovery for human ophthalmic diseases.
- Supports continuity from genetic discovery to preclinical validation of disease mechanisms.
- Reduces logistical barriers to accessing rare or geographically distributed mouse models.
Pipeline & Workflow Integration
This remote enucleation and tissue transfer protocol integrates into the early discovery and preclinical continuum, bridging genetic model generation with centralized phenotyping and analysis.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and mechanistic de-risking by providing access to diverse genetic models.
- Screening: Standardizes sample preparation for reproducible, quantitative phenotyping assays.
- Analytics: Supports acquisition of morphological and molecular readouts for comparative analysis.
- Translational Research: Facilitates alignment of mouse phenotypes with human disease biomarkers.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable protocol for distributed tissue acquisition across research networks.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in genotype-phenotype associations and target validation.
- Operational Value: Streamlines logistics, standardizes procedures, and enables multi-site scalability.
- Strategic Value: Enhances go/no-go decision-making by broadening access to phenotypic data from rare models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of genetic targets and disease models.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency in mouse eye enucleation and tissue handling.
- Needs access to fixation reagents, validated shipping containers, and compliance with shipping regulations.
- Demands cross-site standardization of collection and documentation protocols.
- Adaptable to both unfixed and perfusion-fixed tissue workflows as supported by the protocol.
- Dependent on institutional and governmental guidelines for biological sample transport.
