Name: Ratón enucleación del ojo por remoto de alto rendimiento fenotipificación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Aprende la técnica de enucleación ocular en ratones para fenotipificación de alto rendimiento. Este método permite la fijación tisular precisa y mejora los resultados en estudios de neurociencia.

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Investigación para Prevención de la Ceguera; Bartly J. Mondino MD, Director del Jules Stein Eye Institute de UCLA, y Ramiro Ramírez-Solís, Jacqui Blanca, y Jeanne Estabel en el Instituto Sanger, Wellcome Trust Genoma Campus. Esta investigación cumple con la Declaración de ARVO para el Uso de Animales en Investigación Oftalmológica y Visual.

1. Disección Blunt: Enucleación del ojo del ratón en las muestras no fijadas <ol><li> Separar los párpados para mejorar la exposición y el acceso al mundo posterior (globo ocular) superficie. </li><li> Coloque un vendaje fórceps curvo detrás (en) el mundo en la órbita (cuenca del ojo). El Mahajan Sharptip aderezo fórceps es un instrumento de medida con puntas de hacer este paso más fácil (ver materiales y reactivos de mesa). </li><li> Cierre la pinza y agarrar el tejido conectivo orbital y el nervio óptico detrás del globo mientras que teniendo cuidado de evitar apretar el globo. </li><li> Retire con cuidado la pinza hacia arriba y coger el globo ocular de la órbita. El blanco de hilo tejido es el nervio óptico. </li><li> Coloque el ojo en PBS. Usando una aguja de calibre 30-, hacer una punción única herida inmediatamente posterior al limbo mediante la inserción de la aguja 1-2 mm en el globo ocular. Esto permite fijadores, tales como glutaraldehído, que de otro modo son incapaces de penetrar en el tejido del ojo, a directamente enter el ojo. La creación de esta herida de punción puede no ser necesario si un fijador, tal como paraformaldehído o alcohol, es capaz de difundirse en los tejidos oculares de interés. </li><li> Coloque todo el ojo inmediatamente en fijador para la fijación de inmersión. </li></ol> 2. Disección de Sharp: Enucleación de la fijación del ojo del ratón perfusión siguiente <ol><li> Utilice un fórceps curvo colibri y mantiene los párpados lejos del mundo. </li><li> Orient curvas tijeras de Westcott disección paralelas al mundo, mientras apuntando hacia la parte posterior de la órbita. </li><li> Cortar el tejido conectivo que rodea fijo el mundo, desde las inferiores, a los lados medial, superior y lateral. </li><li> Coloque la pinza curvada detrás del globo, sujete el tejido conectivo sin presionar en el mundo, y tire hacia adelante la enucleación del ojo. Dado que el tejido conjuntivo orbital es rígido en fijación por perfusión, de corte adicional de los tejidos orbitales puede ser necesaria para liberar completamente la globe. </li></ol> 3. La fijación y embalaje Envío de los tejidos fijos deben seguir sus requerimientos de servicios institucionales y los servicios postales, incluyendo las etiquetas y envases apropiados. El protocolo siguiente es un ejemplo de envío de una muestra biológica no infecciosa a temperatura ambiente. Esto requiere 3 capas de embalaje, pero no de clase Sustancia / B biológico o etiquetas de nitrógeno líquido. <ol><li> Coloque el ojo en un vial de vidrio de 5-mL de centelleo con al menos 3-ml fijador, o tampón de post-fijador si la fijación es corto. Escribir el número de seguimiento en la tapa del vial y sellarlo con Parafilm. </li><li> Colocar los viales de centelleo en una muestra biológica aprobada contenedor de envío. En nuestro instituto, por ejemplo, contenedores aprobados requieren tres capas: un recipiente sellado en el que se coloca la muestra, una capa intermedia absorbente, y una capa protectora externa. </li><li> Colocar el recipiente en un paquete de burbuja y luego en una aplicaciónlaboratorio Roved contenedor de transporte junto con la documentación apropiada. </li></ol> 4. Los resultados representativos El examen histológico de los ojos puede ser realizada por una variedad de métodos que incluyen hematoxilina y eosina tinción, la detección de la expresión enzimática, microscopía electrónica de transmisión, y la inmunohistoquímica. Después de la fijación de inmersión en paraformaldehído al 4%, el tejido se embebió en parafina y se seccionaron con un microtomo. En alto rendimiento fenotipificación, se analiza óptica de alumnos por secciones nerviosas que muestra todos los tipos de tejidos en el ojo (Figura 1). Las secciones de tejido también se examinaron para la expresión de lacZ (Figura 2), microscopía electrónica de transmisión de los orgánulos celulares (Figura 3), y la expresión de moléculas específicas con anticuerpos (Figura 4). En nuestro método de cribaje fenotipo, que no era importante para mantener la orientación del ojo con respecto a la nasal (canto medial) y temporal (Lateral) canto lados. Hay por lo menos dos opciones si la orientación del ojo es necesario. Después de la enucleación, hemos aplicado cauterización luz en la córnea temporal en la posición de las tres con un dispositivo de cauterio de mano. La lesión es evidente en la histología y no se pierde durante el procesamiento como tintas histológicos. La desventaja es que los daños de cauterización de la córnea, que puede ser un tejido crítico para su examen. La otra opción requiere un anatomista experto que pueda identificar a las inserciones de los músculos extraoculares. Bajo un microscopio estereoscópico, la identificación de la inserción del músculo oblicuo inferior y superior marca el aspecto inferior y superior y del globo. 3 Con cualquier método de orientación, es importante realizar el seguimiento del espécimen, tal como un ojo derecho o izquierdo. En conjunto, esto permitirá orientación globo exacto antes de cortar. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig1.jpg" alt="Micrografía de anatomía ocular; secciones de histología; cristalino, retina, córnea; Detalles de la capa celular." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Imágenes histológicas ratón ojo afte r adquisición remota. ojos fueron enucleados ratón por disección aguda posterior a la fijación de perfusión con paraformaldehído al 4%. A. alumnos por sección del nervio óptico se tiñeron con hematoxilina y eosina demuestra la preservación de todas las subestructuras de tejidos. ON, nervio óptico. (Barra de escala = 500 micras verde) B. Una visión un aumento mayor de la retina normal muestra su estructura laminar: las células ganglionares de la retina, RGC; capa IPL, plexiforme interna, capa INL, nuclear interna, capa OPL, plexiforme externa; ONL, exterior capa nuclear (células fotorreceptoras) (flecha); IS, segmentos fotorreceptores interiores (cabeza de flecha); OS, fotorreceptoras segmentos externos; RPE, epitelio pigmentario de la retina, coroides, c. (Barra de escala = verde 50 micras) C. En comparación con la retina normal, esta muestra es más delgada debido a la degeneración de los fotorreceptores. La ONL, IS y OS están completamente ausentes (flecha). (Barra verde escala = 50 micras) "Alt =" Figura 2 "/&gt; Figura 2. Expresión de lacZ en ratones transgénicos. Los ojos fueron enucleados mediante disección roma y se sumergieron en 1 mg / ml de X-gal solución (5 mM K3Fe (CN) 6, 5 mM K4Fe (CN) 6, 2 mM MgCl2, 0,02% de NP40 , y 0,1% de desoxicolato de sodio) durante la noche a 37 ° C. Ojos se fijaron en glutaraldehído al 2% formaldehyde/0.2% durante 30 minutos y se seccionaron con un microtomo. X-gal de productos (azul) etiquetas: el epitelio ciliar A., B. epitelio corneal, y la célula C. ganglionares de la retina (RGC) de capa en la retina. INL, la capa nuclear interna, capa ONL, nuclear externa. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig3.jpg" alt="Estructura de la retina; micrografía electrónica que muestra segmentos externos de varilla, células RPE, membrana de Bruch." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Microscopía electrónica de transmisión de epitelio pigmentario de la retina (RPE). Después de la disección roma y la creación de una herida por punción, ojos eran de inmersión fijos en 2,5% de paraformaldehído / 2,5% de glutaraldehído en 0,1 M de tampón fosfato de sodio. Los ojos eran de segundadarily fijado en textroxide de osmio al 1%, se deshidrataron gradualmente, y se incluyeron en resina de Spurr. El tejido se seccionó a 90 nm y se colocaron en rejillas de ranura de cobre Formvar y cubiertos en imágenes utilizando un microscopio electrónico de transmisión. La micrografía muestra, los segmentos externos de los fotorreceptores de la retina neurosensorial, melanosomas (M) en el epitelio pigmentario de la retina, y la membrana de Bruch. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig4.jpg" alt="Imagen de microscopía fluorescente de la estructura de la biopelícula bacteriana; Aumento a escala de 20 micras." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Marcaje inmunohistoquímico de superóxido dismutasa-3 (verde) en el vítreo del ratón. Los ojos fueron enucleados mediante disección roma y se sometieron a fijación inmersión en paraformaldehído al 4%. Ellos fueron incluidos en parafina y se seccionaron utilizando un micrótomo. Las secciones de tejido se incubaron con antisuero policlonal de conejo diluido 1:50 SOD3. SOD3 expresión se detectó usando un anticuerpo de cabra anti-conejo IgG (H + L)-Alexa Fluor 488 de anticuerpo secundario conjugado. Etiquetado de SOD3 se muestra en green.

<ol><li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li>
<li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+Mouse+Eye+Phenomics+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Laboratories%2C+Mouse+Genetics+Meeting%22%5BJournal%5D)">A high-throughput Mouse Eye Phenomics System.</a> Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).</li>
<li>Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. In Research Methods For Mutant Mice. , CRC Press. Boca Raton, FL. (2002).</li>
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<li>Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+genes+encoding+melanosomal+proteins+cause+pigmentary+glaucoma+in+DBA%2F2J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice.</a> Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).</li>
<li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+fundus+photography+and+angiography%3A+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).</li>
<li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+resources+for+vision+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).</li>
<li>Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Results+from+screening+over+9000+mutation-bearing+mice+for+defects+in+the+electroretinogram+and+appearance+of+the+fundus%5BTitle%5D)+AND+%22Vision.+Res%22%5BJournal%5D)">Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus.</a> Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).</li>
<li>Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+mouse+retinal+degenerations.+I.+Correlation+of+indirect+ophthalmoscopy%2C+electroretinograms%2C+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Doc.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology.</a> Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).</li>
<li>Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+in+mice+lacking+the+gamma+subunit+of+the+rod+cGMP+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase.</a> Science. 272, 1026-1029 (1996).</li>
<li>Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+carrying+the+H258N+mutation+in+the+gene+encoding+the+beta-subunit+of+phosphodiesterase-6+%28PDE6B%29+provide+a+model+for+human+congenital+stationary+night+blindness%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mutat%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness.</a> Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Mayoría de los ratones transgénicos que existen en laboratorios que no examinan los ojos. Nuestra técnica de vídeo ilustra un método simple estandarizado para la transferencia remota habilidad quirúrgica para optimizar la adquisición de tejido de laboratorios con poca experiencia con los ojos. Esta técnica ayuda a vídeo superar un escollo importante en alto rendimiento fenotipificación, que es el uso de un número limitado de sitios de expertos por razones de métodos no normalizados de recogida de tejido y la fijación qu...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre </th><th> Empresa </th><th> Número de Catálogo </th><th> Comentarios </th></tr><tr><td> Fórceps curvo Vestir </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> Mahajan Sharptip aderezo fórceps </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1406 (REF SP7-64520) </td><td></td></tr><tr><td> Curvas Tijeras Westcott </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3321 WH </td><td></td></tr><tr><td> 15 ° BD Beaver Microsurgical hoja </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 374881 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 Fine-Castroviejo Pinza para Sutura </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0,12 Colibri fórceps </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 2/132 </td><td></td></tr><tr><td> 30-aguja de calibre </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 305128 </td><td></td></tr><tr><td> Biohazard Mailer </td><td> Pescador </td><td> 03-523-4 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Pescador </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Viales de centelleo de vidrio </td><td> Wheaton </td><td> 4500413033 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> 16% de paraformaldehído </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 15700 </td><td></td></tr><tr><td> 2,5% de paraformaldehído / 2,5% de glutaraldehído en tampón de fosfato sódico 0,1 M </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 15700 y 16300 </td><td> Mezclado en laboratorio </td></tr><tr><td> 50% de glutaraldehído </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 16300 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% Formvar </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 15810 </td><td></td></tr><tr><td> Policíapor cuadrícula Slot </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> M2010-CR </td><td></td></tr><tr><td> 4% de tetróxido de osmio </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 19140 </td><td></td></tr><tr><td> Anticuerpo anti-SOD3 </td><td> Abcam </td><td> Ab21974 </td><td></td></tr><tr><td> De cabra anti-conejo Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11070 </td><td></td></tr><tr><td> Incrustación de resina de Spurr </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 14300 </td><td></td></tr></tbody></table>

ratón enucleación del ojo por remoto de alto rendimiento fenotipificación

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

El ojo del ratón es un modelo genético importante para el estudio de traslación de la enfermedad oftálmica humano. Enfermedades que causan ceguera en los seres humanos, como la degeneración macular, degeneración de los fotorreceptores, las cataratas, el glaucoma, el retinoblastoma y la retinopatía diabética se han recapitulado en ratones transgénicos. 1-5 mayoría de los ratones transgénicos y knock-out han sido generados por los laboratorios para estudiar las enfermedades no oftalmológicas, pero conservación genética entre los sistemas de órganos sugiere que muchos de los mismos genes también puede desempeñar un papel en el desarrollo y la enfermedad ocular. Por lo tanto, estos ratones representan un recurso importante para el descubrimiento de nuevas correlaciones genotipo-fenotipo en el ojo. Debido a que estos ratones se encuentran dispersos en todo el mundo, es difícil de adquirir, mantener y fenotipo ellos de una manera eficiente y rentable manera. Así, la mayoría de alto rendimiento pantallas fenotipificación oftálmicas se limita a unos pocos lugares que requieren en el lugar, la experiencia oftálmica para examinar los ojos en ratones vivos. 6-9 Un enfoque alternativo desarrollado por nuestro laboratorio es un método para la adquisición remota de tejido que se puede utilizar en grandes encuestas o en pequeña escala de los ojos de ratones transgénicos. Los procedimientos estandarizados de vídeo basado en la transferencia de habilidades quirúrgicas, la fijación del tejido, y el envío permitir que cualquier laboratorio para recolectar los ojos enteros de animales mutantes y enviarlos por fenotipificación molecular y morfológica. En este artículo, video, presentamos las técnicas de la enucleación y transferir los ojos fijos tanto no fijadas y la perfusión de ratón para el análisis fenotípicos remotos.

La técnica de disección ilustra la enucleación del ojo del ratón para la fijación del tejido para realizar el fenotipado de alto rendimiento pantallas.

Ratón enucleación del ojo por remoto de alto rendimiento fenotipificación

El ojo del ratón es un modelo genético importante para el estudio traslacional de las enfermedades oftálmicas humanas. Las enfermedades que provocan ceguera en los seres humanos, como la macular...

Este video ilustrará el ojo del ratón y la enucleación, es decir, la extracción del globo ocular de la órbita. El globo ocular está delimitado por el margen del párpado inferior. Aquí se encuentra el ángulo medial o nasolagrimal.En la parte posterior se encuentra el ángulo temporal o lateral. Por encima está el borde del párpado superior. Aquí hay un espécimen quirúrgico.La aguja está apuntando hacia la córnea transparente. Podemos ver un poco del cristalino sobresaliendo más allá del iris. El iris está aquí en color marrón, cubriendo el cristalino.El punto de referencia quirúrgico más importante es esta línea blanca, o el limbo, donde se realizará una herida punzante justo detrás de ella. La mitad posterior del globo ocular se encuentra detrás del limbo y estamos señalando una inserción muscular. Puede observarse el músculo situado contra el globo aquí, y luego el tejido conectivo que llena la órbita y que incluye la glándula lagrimal.Y finalmente, esta es la larga franja blanca del nervio óptico obtenida mediante una disección roma. Utilizando una pinza curva para apósitos modificada con una punta afilada, comience separando los párpados. Esto tiende a hacer que el ojo sobresalga hacia afuera.Utilice cuidadosamente la pinza para introducirla en la órbita y detrás del globo ocular, comprima suavemente detrás del globo sin apretarlo y tire hacia adelante. Debería haber logrado agarrar el tejido conectivo y no el globo ocular. Si gira el globo ocular hacia un lado, puede observar el tejido orbitario junto con el nervio óptico blanco.Esta es una segunda disección solo para mostrar nuevamente que se accede por el canto, se introducen la pinza detrás del globo ocular, se agarra el tejido conjuntivo y se tira hacia adelante sin ejercer presión sobre el globo ocular en sí. Nuevamente, puede observarse el tejido conjuntivo en la larga franja blanca del nervio óptico. Para crear una herida por punción, sujete el globo ocular por una inserción muscular e introduzca una aguja detrás del limbo, justo al lado del punto donde sostiene el ojo para estabilizarlo.Esto permitirá que el fijador entre en el ojo. Si realiza la punción lejos del lugar donde sostiene el ojo, el globo ocular será muy inestable y será difícil hacer esa herida sin comprimir el ojo o aplicar presión excesiva. También puede sujetar todo el tejido conectivo justo detrás del globo ocular.Algunos fijadores no requieren una herida por punción. En general, colocamos el ojo en un vial de centelleo de cinco cc con al menos tres cc de fijador para asegurarnos de que el ojo quede sumergido. Para animales fijados por perfusión, es necesaria una disección precisa.Utilizamos una pinza curva de calibre calibri y tijeras curvas de Wescott. Sujete el párpado inferior con la pinza de calibre calibri. Introduzca las tijeras contra el hueso orbitario y comience a cortar el tejido conectivo.Utilizamos la curva alejada del globo ocular y evitamos medir. Cualquier parte del ojo funcionará a lo largo de todo el borde del párpado inferior, desde un ángulo hasta el otro. En un punto determinado, se eliminará la mayor parte del tejido conectivo, y podrá deslizar las tijeras detrás del globo y separarlo.Aquí hay otro ejemplo nuevamente: inserte las tijeras en la órbita, pero contra el hueso orbitario en lugar del globo ocular, y corte el tejido conectivo. Esto comenzará a liberar el globo ocular, que es como una pelota de baloncesto dentro de una cesta. Use la pinza para retraer los párpados y realice cortes suaves y cortos alrededor del globo ocular.Aquí sujetamos el tejido conectivo o una inserción muscular con el Collibra y terminamos de cortar el globo ocular del tejido conectivo orbitario. Después de que los globos oculares están adecuadamente fijados, y si es necesario transportarlos, colocamos una película para sellar alrededor del vial de almacenamiento.El embalaje debe cumplir con las regulaciones de su universidad y del gobierno. Normalmente colocamos estos elementos en un recipiente con algo de algodón para atrapar cualquier líquido; este recipiente debe sellarse muy bien. Luego, este recipiente de envío se coloca en una bolsa de burbujas.Esto se coloca en un embalaje de envío para líquidos de laboratorio, junto con cualquier documentación.

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Research

Investigación

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Medicine

Medicina

Este protocolo describe un método simple y económico para cuantificar la actividad de los elementos reguladores cis (es decir, potenciador / promotores) que viven en la retina del ratón a través de electroporación explante. Preparación del análisis de ADN, la disección de la retina, la electroporación, la cultura de explantes de retina, y después de la fijación y cuantificación se describen.

La cuantificación de la actividad de Cis Elementos reguladores en la retina del ratón por electroporación explante

Source: Jagodzinska, J., et. al., Tomografía de Coherencia Óptica: Imágenes de las Células Gangliales de la Retina del Ratón In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  En este video, demostramos el uso de la tomografía de coherencia óptica de dominio espectral (SD-OCT) para obtener imágenes de las capas de la retina y evaluar los cambios estructurales en un modelo de ratón modificado genéticamente con neuropatía óptica.

Obtención de imágenes in vivo de la retina del ratón mediante tomografía de coherencia óptica

La eliminación de los ojos, también llamado enucleación, ofrece una estrategia útil para estudiar los aspectos de la visual, cross-modal, y la plasticidad del desarrollo a lo largo del sistema visual de mamíferos ya que induce irreversible parcial (monocular) o completa (binocular) pérdida de la visión. Aquí se describe un enfoque altamente reproducible y fácil de realizar en la enucleación vivo.

Un método altamente reproducible y fácil de Perform En Vivo Ocular enucleación en el ratón después de la abertura del ojo

En este artículo describimos los principios para diseñar y realizar un experimento de trazado de linaje multicolor utilizando ratones R26R-Confetti. Proporcionamos un protocolo específico para el seguimiento de las células epiteliales de la córnea que puede ser modificado para otros tejidos de interés.

Un método para Lineage Tracing de células corneales Uso de Multi-color de los ratones reportero fluorescente

Aquí nos muestran un nuevo enfoque al uso de tomografía de coherencia óptica de dominio espectral de alta resolución (HR-SD-OCT) para facilitar la presentación de los agentes de terapia génica en el espacio subretinal, evaluar su cobertura areal y caracterizan la vitalidad del fotorreceptor.

Tomografía de coherencia óptica ultraalta resolución ratón para facilitar la inyección Intraocular en investigación de retina la terapia génica

Aquí se presenta una plataforma microscópica multifoto para imágenes de superficie ocular de ratón en vivo. El ratón fluorescente transgénico permite la visualización de núcleos celulares, membranas celulares, fibras nerviosas y capilares dentro de la superficie ocular. Las señales no lineales de segunda generación armónica derivadas de estructuras de collagenounous proporcionan imágenes sin etiquetas para arquitecturas estromales.

Una plataforma de microscopía multifoto personalizada para imágenes en vivo de cornea de ratón y conjuntiva

La imagen in vivo es una herramienta poderosa para el estudio de la biología en la salud y la enfermedad. Este protocolo describe imágenes transpupilares de la retina del ratón con un microscopio estándar de dos fotones. También demuestra diferentes métodos de imagen in vivo para etiquetar fluorescentemente múltiples cohortes celulares de la retina.

Imágenes transpupilares de dos fotones in vivo de la retina del ratón

Este protocolo, que fue reportado originalmente por Fernandez-Godino et al. en 20161,describe un método para aislar eficientemente y cultivo de células RPE del ratón, que forman una monocapa RPE funcional y polarizada dentro de una semana en las placas Transwell. El procedimiento dura aproximadamente 3 horas.

Disección eficiente y cultivo de células epiteliales de pigmento retiniano de ratón primario

Este artículo presenta un protocolo para la microdisección ocular en roedores. El proceso implica la enucleación del globo ocular junto con la membrana nictitante (es decir, el tercer párpado). Esto es seguido por la separación de las copas oculares posterior y anterior.

Microdisección del ojo de roedor

La retina exhibe una organización espacial compleja a través de su estructura laminar. La transcriptómica espacial moderna y las técnicas de secuenciación requieren secciones de tejido &lt; 20 μm de grosor, lo que limita su aplicabilidad en la investigación de la retina. Este método de criosección recién congelada produce secciones delgadas en la cara de la retina del ratón al tiempo que preserva las relaciones espaciales planas, lo que permite un mapeo molecular completo a través de las...

En la cara Crioseccionamiento de retina de ratón para análisis molecular espacial de alta dimensión

Este artículo demuestra un método para visualizar y cuantificar la motilidad y el contacto de la microglía con puntos postsinápticos en la retina mediante microscopía confocal de disco giratorio.

Imágenes en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía e interacciones con sinapsis en retina murina enferma

Aprende la técnica de enucleación ocular en ratones para fenotipificación de alto rendimiento. Este método permite la fijación tisular precisa y mejora los resultados en estudios de neurociencia.

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