Name: Mejora de la inducción de apoptosis y la autofagia mediante un sintético nuevo C-1 analógica de 7-deoxypancratistatin en el adenocarcinoma de mama humano y células de neuroblastoma con tamoxifeno (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 44 s
Description: Aprende a evaluar la citotoxicidad selectiva de JCTH-4 y tamoxifeno en células de cáncer de mama MCF-7 y neuroblastoma SH-SY5Y. Este método permite estudiar apoptosis y autofagia mitocondrial en oncología.

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Este trabajo ha sido apoyado por los Caballeros de Colón el Capítulo 9671 (Windsor, Ontario), y Federico Banting CIHR y Charles Best Canadá Becas de Posgrado otorgó a Dennis Ma. Gracias a Hodge, Robert y Elizabeth Fidalgo da Silva por su ayuda con la microscopía de lapso de tiempo. Gracias a Katie Facecchia para la edición de los vídeos de microscopía de time-lapse. También nos gustaría dar las gracias a Sudipa junio Chatterjee y Tremblay Phillip para la revisión crítica de este manuscrito. Este trabajo está dedicado en memoria de Kevin Couvillon quien perdió su batalla contra el cáncer en 2010.

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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

PST y compuestos similares se han demostrado tener propiedades anti-cancerígenas 11-15,21. Hemos informado anteriormente de PST naturales para desestabilizar selectivamente la mitocondria en células cancerosas, que por lo tanto induce la apoptosis por la liberación de factores de apoptogénicos 12,14. Lo más probable es que JCTH-4 actúa a través del mismo mecanismo; JCTH-4 provocó el colapso de MMP en células MCF7 como se ha visto con la tinción de TMRM (Fig. 5a), y el aumento de la...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del Material </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> SH-SY5Y línea celular </td><td> ATCC </td><td> CRL-2266 </td></tr><tr><td> Dulbecco Modificado Eagles medio F-12 de Ham </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 51448C </td></tr><tr><td> Suero bovino fetal </td><td> Gibco BRL </td><td> 16000-044 </td></tr><tr><td> MCF7 línea celular </td><td> ATCC </td><td> HTB-22 </td></tr><tr><td> Medio RPMI-1640 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R 0883 </td></tr><tr><td> Al parecer humano normal del feto línea celular de fibroblastos (NFF) </td><td> Instituto Coriell para la Investigación Médica </td><td> AG04431B </td></tr><tr><td> Dulbecco Modificado Medio Eagle, medio de glucosa de alta </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30022.01 </td></tr><tr><td> El tamoxifeno sal de citrato </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T9262 </td&gt; </tr><tr><td> 35 mm de vidrio platos de fondo la cultura </td><td> MatTek </td><td> P35G-014-C </td></tr><tr><td> Leica DMI6000 B microscopio invertido </td><td> Leica Microsystems </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Colorante Hoechst 33342 </td><td> Molecular Probes </td><td> H3570 </td></tr><tr><td> Leica DM IRB invierte microscopio de fluorescencia </td><td> Leica Microsystems </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Anexina V-488 AlexaFluor </td><td> Invitrogen </td><td> A13201 </td></tr><tr><td> Solución de azul de tripano </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8154-20ML </td></tr><tr><td> Hemocitómetro </td><td> Fisher Scientific </td><td> 267110 </td></tr><tr><td> WST-1 reactivos </td><td> Roche Ciencias Aplicadas </td><td> 11644807001 </td></tr><tr><td> Wallac Victor 3 1420 Multilabel Contador </td><td> PerkinElmer </td><td> 1420-011 </td></tr><tr><td> Tetramethylrhodamine metil éster (TMRM) </td><td> Gibco BRL </td><td> T-668 </td></tr><tr><td> Vidrio triturador de tejidos </td><td> Fisher Scientific </td><td> K8885300-0002 </td></tr><tr><td> BioRad ensayo de proteínas </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> 500-0001Bottom del Formulario </td></tr><tr><td> Amplex Roja </td><td> Invitrogen </td><td> A12222 </td></tr><tr><td> Peroxidasa de rábano (HRP) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8125 </td></tr><tr><td> SpectraMax Gemini XPS </td><td> Molecular Devices </td><td> 3126666 </td></tr><tr><td> Anti-LC3 anticuerpo producido en conejo </td><td> Novus Productos Biológicos </td><td> NB100-2220 </td></tr><tr><td> Anti-ratón conjugado HRP-anticuerpo secundario </td><td> Abcam </td><td> ab6728 </td></tr><tr><td> Anti-conejo conjugado HRP-anticuerpo secundario </td><td> Abcam </td><td> ab6802 </td></tr><tr><td> Quimioluminiscencia sustrato de peroxidasa </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> CPS160 </td></tr><tr><td> Monodansylcadaverine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 30432 </td></tr></tbody></table>

mejora de la inducción de apoptosis y la autofagia mediante un sintético nuevo c-1 analógica de 7-deoxypancratistatin en el adenocarcinoma de mama humano y células de neuroblastoma con tamoxifeno

Enhancement of Apoptotic and Autophagic Induction by a Novel Synthetic C-1 Analogue of 7-deoxypancratistatin in Human Breast Adenocarcinoma and Neuroblastoma Cells with Tamoxifen

El cáncer de mama es uno de los cánceres más comunes entre las mujeres en América del Norte. Muchos de los actuales tratamientos contra el cáncer, incluyendo la radiación ionizante, inducir la apoptosis a través de daños en el ADN. Desafortunadamente, estos tratamientos no son selectivos para las células cancerosas y producir toxicidad similar en células normales. Nos han informado de la inducción selectiva de apoptosis en las células cancerosas por el pancratistatin compuesto natural (PST). Recientemente, un nuevo análogo de PST, un derivado C-1 de 7-acetoximetil deoxypancratistatin (JCTH-4), fue producido por la síntesis de novo y exhibe comparables actividad selectiva inductor de apoptosis en varias líneas celulares de cáncer. Recientemente, la autofagia se ha implicado en enfermedades malignas como tanto pro-supervivencia y pro-muerte mecanismos en respuesta a la quimioterapia. El tamoxifeno (TAM) invariablemente ha demostrado la inducción de pro-supervivencia autofagia en numerosos tipos de cáncer. En este estudio, la eficacia de JCTH-4 solos y en combinación con TAM para inducir la muerte celular en cancia de mama humanor (MCF7) y neuroblastoma (SH-SY5Y), las células se evaluó. TAM sola indujo la autofagia, pero la muerte celular insignificante, mientras que JCTH-4 solo causó la inducción de la apoptosis significativa con un poco de la inducción de la autofagia. Curiosamente, el tratamiento combinatorio producido un aumento drástico en la inducción de la apoptosis y la autofagia. Estamos supervisados ​​dependientes del tiempo los cambios morfológicos en las células MCF7 sometidos a TAM inducida por la autofagia, las JCTH-4-inducida por la apoptosis y la autofagia, y la muerte acelerada de las células con el tratamiento combinatorio utilizando time-lapse microscopía. Hemos demostrado que estos compuestos para inducir la apoptosis / autofagia mediante la focalización mitocondrial en las células cancerosas. Es importante destacar que estos tratamientos no afectó la supervivencia de fibroblastos humanos no cancerosas. Por lo tanto, estos resultados indican que JCTH-4 en combinación con TAM podría ser utilizado como una caja fuerte y muy potentes contra el cáncer terapia contra el cáncer de mama y de células de neuroblastoma.

Hemos sintetizado un análogo de la novela de pancratistatin comparables con actividad anti-cáncer como pancratistatin nativa, curiosamente, el tratamiento combinatorio con el tamoxifeno produjo una mejora drástica en la inducción de la apoptosis y la autofagia en las mitocondrias con un efecto mínimo sobre los fibroblastos no cancerosas. Por lo tanto, JCTH-4 en combinación con el tamoxifeno podría proporcionar un seguro anti-terapia contra el cáncer.

Mejora de la inducción de apoptosis y la autofagia mediante un sintético nuevo C-1 analógica de 7-deoxypancratistatin en el adenocarcinoma de mama humano y células de neuroblastoma con tamoxifeno

El cáncer de mama es uno de los cánceres más frecuentes entre las mujeres en Norteamérica. Muchos de los tratamientos anticancerosos actuales, incluida la radiación ionizante, inducen ...

El objetivo general de este procedimiento es evaluar la toxicidad selectiva y el mecanismo de muerte celular inducido por el J CTH cuatro, un análogo sintético del compuesto natural pancreatostatina, solo y en combinación con tamoxifeno, en células humanas de cáncer de mama y neuroblastoma. Esto se logra primero cultivando células de cáncer de mama MC Seven, células de neuroblastoma SHSY Five Y y fibroblastos fetales normales o NFF. El segundo paso consiste en evaluar la citotoxicidad del J CTH cuatro y del tamoxifeno, solos o en combinación.Mediante el tratamiento de células con estos fármacos y la monitorización de cambios morfológicos dependientes del tiempo, característicos de la apoptosis y la autofagia. A continuación, se investiga el mecanismo de inducción de apoptosis y autofagia mediante la monitorización del potencial de membrana mitocondrial y la producción de especies reactivas de oxígeno en mitocondrias aisladas de estas células cancerosas. Finalmente, se utilizan fotografía de intervalos y diversos ensayos bioquímicos para demostrar que JCT cuatro induce apoptosis y autofagia en células de cáncer de mama humano y neuroblastoma, y que estos efectos se ven notablemente

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Tipo B a base de gelatina sistema nanovectors ingeniería (gens) fue desarrollado para la entrega de genes sistémicos y transfección en el tratamiento del cáncer de páncreas. Por la modificación con el receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) péptido específico en la superficie de nanparticles, podrían dirigir a los receptores EGFR y la liberación del plásmido en la reducción de medio ambiente, tales como altas concentraciones de glutatión intracelular.

Entrega y transfección de genes en células humanas de cáncer de páncreas con factor de crecimiento epidérmico receptor dirigidos a base de gelatina Nanovectors Ingeniería

La autofagia es un proceso ubicuo que permite a las células para degradar y reciclar las proteínas y orgánulos. Aplicamos microscopía de fluorescencia avanzada para visualizar y cuantificar la pequeña, pero, cambios físicos esenciales asociados con la inducción de la autofagia, incluyendo la formación y distribución de autofagosomas y lisosomas, y su fusión en autolisosomas.

Análisis cuantitativo de la autofagia mediante microscopía de fluorescencia avanzada 3D

La actividad citotóxica de la fenantridina PJ-34 en células de cáncer sometidos a la mitosis se documentó en tiempo real por imagen confocal en vivo. 34 PJ-erradicar el cáncer de mama humano MDA-MB-231 células que albergan actividades extra-centrosomas en la mitosis. A diferencia de la mitosis bi-focal normal, las actividades extra-centrosomas no se agruparon en los dos polos del huso en la presencia de PJ-34.

La muerte celular asociada con Mitosis anormal observada por Imagen confocal en vivo las células cancerosas

Cultivo tridimensional de células epiteliales mamarias sobre una membrana basal reconstituida es un método útil para recapitular la arquitectura in vivo de la benigna de la mama, y para diferenciar el fenotipo maligno de la fenotipo benigna de la mama. Es importante destacar que este sistema se puede aplicar para estudiar los carcinomas invasivos en otros tejidos.

Tres Culturas dimensionales: una herramienta para estudiar normal Acinar Arquitectura vs transformación maligna de las células de la mama

Se describe un módulo de laboratorio factible para estudiantes de biología que explora conceptos celulares y moleculares avanzados utilizando el cultivo de células animales. Los estudiantes cultivan, caracterizan y manipulan un modelo de células de cáncer de mama mediante la exposición a agentes de quimioterapia. La viabilidad celular se analiza mediante el recuento de células utilizando un método estándar y novedoso.

El uso de células tumorales mamarias de ratón para enseñar conceptos básicos de biología: Un módulo de laboratorio simple

Aquí, describimos un método de microscopía de lapso de tiempo a largo plazo para rastrear longitudinalmente células individuales en respuesta a terapias contra el cáncer.

A través del espejo: Microscopía de lapso de tiempo y de seguimiento longitudinal de las células individuales para el Estudio de la terapéutica contra el cáncer

Este procedimiento demostrará cómo sintetizamos y caracterizamos la actividad de las células madre anti-NFκB y anticancerosas de un profármaco aspirina-fumarato.

Síntesis y caracterización de un profármaco Aspirina-fumarato que inhibe la actividad de NFkB y de la mama células madre del cáncer

El objetivo de este protocolo es determinar los niveles autofágicos en el cáncer de páncreas y las células acinares pancreáticas a través de la inmunofluorescencia LC3 y la cuantificación de puntos LC3.

Evaluación de los niveles de autofagia en dos modelos diferentes de células pancreáticas utilizando inmunofluorescencia LC3

El presente protocolo describe una estrategia integral para evaluar la acción farmacológica y el mecanismo del salidrósido en la inhibición de la proliferación y migración de células MCF-7.

Exploración de la acción farmacológica y el mecanismo molecular del salidrósido en la inhibición de la proliferación y migración de células MCF-7

El método se describe el aislamiento y caracterización de células humanas de la Pulpa Dental madre (hDPSCs) mediante el uso de cualquiera de los...

Diferenciación de aislamiento, caracterización y comparativo de las células madre derivadas de la Pulpa Dental de los dientes permanentes mediante dos métodos diferentes

Aprende a evaluar la citotoxicidad selectiva de JCTH-4 y tamoxifeno en células de cáncer de mama MCF-7 y neuroblastoma SH-SY5Y. Este método permite estudiar apoptosis y autofagia mitocondrial en oncología.

Mejora de la inducción de apoptosis y la autofagia mediante un sintético nuevo C-1 analógica de 7-deoxypancratistatin en el adenocarcinoma de mama humano y células de neuroblastoma con tamoxifeno (Video) | JoVE Journal

Mejora de la inducción de apoptosis y la autofagia mediante un sintético nuevo C-1 analógica de 7-deoxypancratistatin en el adenocarcinoma de mama humano y células de neuroblastoma con tamoxifeno

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