La prueba de la suspensión trasera
January 28th, 2012
La prueba de la cola de suspensión se valida como un procedimiento experimental para evaluar la eficacia de los tratamientos farmacológicos antidepresivos en ratones. Los ratones son suspendidos por la cola durante seis minutos y escapar de conductas relacionadas con la evaluación son. Se describen los procedimientos utilizados en la realización de la prueba de suspensión de la cola.
La prueba de suspensión de cola es una prueba de comportamiento común que se utiliza para predecir la eficacia antidepresiva de varias manipulaciones experimentales. Esta película muestra los procedimientos de esta prueba. La prueba de suspensión de la cola está validada para el ratón y no se recomienda para roedores más grandes.
En la prueba de suspensión de cola, los ratones están suspendidos por sus colas. El ratón permanece suspendido durante seis minutos. Los comportamientos del sujeto se registran durante este tiempo.
Al final del período de prueba de seis minutos, la cinta se retira de la cola del sujeto. Una vez completada la prueba, las grabaciones visuales se transfieren a una computadora o monitor de video. Para el análisis, un observador mide el tiempo que un ratón pasa luchando durante toda la sesión de seis minutos.
Los compuestos con propiedades antidepresivas aumentan la cantidad de tiempo que paso luchando. Esto se refleja en períodos más cortos de inmovilidad. Por ejemplo, hemos informado que el medicamento estabilizador del estado de ánimo litio, que es clínicamente útil como medicamento antidepresivo complementario, disminuyó el tiempo de inmovilidad en la prueba de suspensión de cola.
Hola, mi nombre es Sean, del laboratorio del Dr. Todd Gould en el Departamento de Psiquiatría de la Facultad de Medicina de la Universidad de Maryland en Baltimore. Hola, soy Chantel del mismo laboratorio. En este vídeo, te vamos a mostrar cómo realizar y puntuar la prueba de la suspensión trasera.
La prueba de suspensión de cola se utiliza para evaluar la eficacia potencial de los tratamientos antidepresivos. Así que vayamos al laboratorio y le mostremos cómo realizar el experimento. Aunque no es obligatorio, utilizamos una caja de suspensión trasera especialmente diseñada.
Para esta prueba. Nuestra caja de suspensión trasera está dividida en cuatro compartimentos, cada uno reservado para un solo ratón. Los divisores evitan que los ratones se observen entre sí durante la prueba.
Sin embargo, es posible utilizar un estante u otra estructura para suspender a los ratones. Las dimensiones de la caja de prueba de la suspensión trasera se seleccionan para evitar que los ratones alcancen y se agarren a los bordes. Antes de comenzar el experimento, corta suficientes fragmentos de cinta y marca el segmento que se va a utilizar para la adhesión a la cola.
En nuestro laboratorio, utilizaremos fragmentos de cinta de 17 centímetros. A dos centímetros del extremo de este fragmento de cinta se debe marcar y se utilizará para adherirse a la cola. Colocamos la cola en el centro de esta porción de dos centímetros.
Coloque la caja de prueba de la suspensión trasera y la cámara de video. Antes de introducir los animales, se debe limpiar a fondo la caja con una solución esterilizante para neutralizar los olores dejados por los sujetos anteriores. En nuestro laboratorio, utilizamos dos cajas de suspensión trasera diferentes, idénticas en todos los aspectos excepto en el color.
Para los ratones albinos, una caja gris oscura proporciona un buen contraste para las grabaciones de video. Para las cepas de ratón de color más oscuro, una caja blanca es apropiada. Encienda la máquina de ruido blanco.
Debe enmascarar cualquier sonido intermitente. Lleve a los ratones a la sala de procedimientos para que se aclimaten. Las condiciones de la habitación deben mantenerse constantes y libres de ruidos, cambios en los niveles de luz y otras posibles interrupciones.
Este período es generalmente de al menos una hora. Una vez que finaliza el período de aclimatación, la prueba puede continuar para evitar que ciertas cepas de ratones trepen por sus colas. Durante la prueba de suspensión trasera, utilizamos cilindros de plástico que colocamos sobre las colas.
Estos cilindros descansan en la base de su cola durante la prueba. En nuestro laboratorio, utilizamos cilindros de plástico de cuatro centímetros de largo, un centímetro de diámetro y un peso de 1,5 gramos. Si se utilizan cilindros de plástico para evitar la escalada, deben colocarse en las colas antes de aplicar la cinta.
Aplicamos cinta adhesiva en el extremo de la cola con dos o tres milímetros de la cola que quedan fuera de la cinta. Adhiere la cinta a las colas de los ratones en su jaula de casa. Use el extremo marcado de la cinta y asegúrese de que la cinta se adhiera a la cola y vuelva sobre sí misma.
Una vez que se haya colocado la cinta, asegure cada ratón a las paredes de la jaula para evitar que se enrede la cinta unida a diferentes animales. Complete este proceso rápidamente. De lo contrario, los ratones estarán sometidos a un estrés innecesario.
La grabación debe iniciarse antes de que los animales sean suspendidos. Suspenda a los animales colocando el extremo libre de la cinta en la barra de suspensión en un orden que se equilibre entre los grupos de tratamiento y de manera que no obstruya la vista de la cámara. Debido a que los ratones están suspendidos uno por uno, cada animal tiene una hora de inicio ligeramente diferente para la prueba.
Asegúrese de comenzar a puntuar cada mouse exactamente al comienzo de su período de suspensión. Es importante no obstruir la vista de la cámara. Dado que toda la sesión de suspensión trasera se puntuará como obstruccionista, la vista de la cámara podría provocar la falta de datos.
Asegúrese de que todos los extremos de la cinta estén perpendiculares a la barra de suspensión con la misma longitud de holgura. Para cada tema, inicie el temporizador. La prueba de la suspensión trasera es de seis minutos.
Una vez que transcurra el período de prueba de seis minutos, retire la cinta del extremo de cada cola y devuelva a los ratones a su jaula de origen. Al final de la prueba, la información del sujeto debe ser grabada en video. Después de que los ratones regresen a la sala de colonias, la caja de prueba debe limpiarse a fondo y limpiarse con una solución de esterilización.
Ahora que hemos terminado con las pruebas, discutiremos la puntuación de los comportamientos. La única variable que se suele evaluar a la hora de puntuar la prueba de suspensión de cola es el tiempo que los animales están inmóviles. Para obtener el tiempo de inmovilidad, mediremos el tiempo que los ratones están en movimiento y lo deduciremos del tiempo de prueba de seis minutos. Estaremos anotando los seis minutos completos de la prueba.
Primero cubrimos los ratones que no están siendo evaluados para permitir que el observador se concentre en un solo animal por cada ratón que pasa el ratón. El móvil se mide mediante un cronómetro en pantalla controlado por un dispositivo de gamepad. Aquí, como puede ver, hay dos cronómetros separados en pantalla que se controlan simultáneamente.
El primer cronómetro cuenta hacia atrás desde 360 segundos e indica la duración de la prueba al observador. El segundo cronómetro mide el tiempo que los sujetos permanecen en movimiento. Como puede notar, el segundo cronómetro está cubierto por el primer cronómetro y solo sus decimales de milisegundos son visibles para el observador.
De esta manera, el observador podrá ver si el cronómetro está contando, pero no podrá ver el tiempo total de movilidad hasta que se complete la puntuación. Hacemos esto para evitar que el sesgo del observador afecte a los resultados. Los ratones, especialmente al comienzo de la sesión, manifiestan comportamientos relacionados con la huida.
Estos comportamientos incluyen tratar de alcanzar las paredes del aparato y la barra de suspensión, sacudidas fuertes del cuerpo y movimientos de las extremidades similares a correr. Estos movimientos constituyen claramente la movilidad. Sin embargo, a medida que avanza la prueba, los movimientos se vuelven más sutiles.
En nuestro laboratorio, no contamos los pequeños movimientos que se limitan a las patas delanteras, pero sin ningún movimiento de las patas traseras como movilidad. Además de esto, las oscilaciones similares al péndulo que se deben a la ganancia de impulso durante los episodios de movilidad anteriores no se consideran movilidad. Ahora veamos la puntuación de una sesión de prueba de suspensión trasera real.
Generalmente se informa sobre el tiempo de inmovilidad, no el tiempo de movilidad. El tiempo de inmovilidad se puede calcular restando el tiempo total de movilidad del tiempo de prueba de 360 segundos. Puntuación. La prueba de la suspensión trasera requiere entrenamiento y práctica.
Es importante establecer un estándar interno de laboratorio y capacitar a los nuevos observadores hasta que alcancen un alto nivel de confiabilidad. En este artículo, explicamos cómo realizar y puntuar la prueba de suspensión trasera. Buena suerte con tus futuros experimentos.
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Visión general
La prueba de suspensión de la cola es un procedimiento conductual validado que se utiliza para evaluar la eficacia antidepresiva de los tratamientos farmacológicos en ratones. Durante esta prueba, los ratones se suspenden por la cola durante seis minutos y se registran sus comportamientos relacionados con el escape.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia conductual
- Psicofarmacología
- Modelos animales de depresión
Antecedentes
- La prueba de suspensión de la cola se utiliza ampliamente en la investigación para evaluar los efectos antidepresivos.
- Esta prueba está específicamente validada para su uso en ratones y no es adecuada para roedores más grandes.
- Proporciona información sobre la eficacia de varias manipulaciones experimentales.
- Las observaciones conductuales durante la prueba pueden indicar el nivel de desesperación o disposición a escapar.
Propósito del estudio
- Demostrar los procedimientos de la prueba de suspensión de la cola.
- Validar la prueba como una medida confiable de la eficacia antidepresiva.
- Proporcionar un método estandarizado para evaluar las respuestas conductuales en ratones.
Métodos utilizados
- Los ratones se suspenden por la cola durante una duración de seis minutos.
- Se registran y analizan las respuestas conductuales durante el período de suspensión.
- La prueba evalúa los comportamientos relacionados con el escape que son indicativos de los niveles de humor y ansiedad.
- Se siguen procedimientos estandarizados para garantizar la consistencia y fiabilidad.
Resultados principales
- Los datos conductuales recopilados durante la prueba se pueden correlacionar con los resultados del tratamiento antidepresivo.
- La prueba diferencia eficazmente entre los efectos de varios medicamentos en el estado de ánimo.
- Los resultados contribuyen a la comprensión de la depresión y la eficacia del tratamiento en modelos animales.
- Los resultados estandarizados pueden ayudar en el desarrollo de nuevas terapias antidepresivas.
Conclusiones
- La prueba de suspensión de la cola es una herramienta valiosa para evaluar la eficacia antidepresiva en ratones.
- Proporciona un método confiable para que los investigadores evalúen las respuestas conductuales a los tratamientos.
- El uso continuo de esta prueba puede mejorar la comprensión de la depresión y sus tratamientos farmacológicos.
Preguntas frecuentes
Executive Industry Relevance
The tail suspension test provides a standardized behavioral readout for evaluating antidepressant-like activity in preclinical models, supporting early-stage target validation and mechanistic de-risking of CNS-active compounds. By quantifying escape-oriented behaviors as a proxy for behavioral despair, the assay enables high-throughput screening of prospective therapeutics with predictive confidence in mood disorder indications. This assay informs go/no-go decisions in discovery pipelines by linking pharmacological modulation to quantifiable behavioral outputs relevant to antidepressant efficacy.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Interrogates therapeutic hypotheses related to monoaminergic and glutamatergic pathways implicated in mood regulation.
- Operational Value: Enables functional validation of targets through dose-responsive changes in immobility time, reducing false positives in target engagement.
- Predictive Value: Supports portfolio triage by identifying compounds with sustained effects on behavioral despair across multiple chemotypes.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Delivers quantitative, time-based immobility metrics suitable for automation and plate-based screening formats.
- Reproducibility: Standardized suspension duration and scoring protocols minimize inter-observer variability when internal reliability thresholds are met.
- Scalability: Compatible with multi-compartment testing boxes and video tracking systems for parallel evaluation of compound libraries.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Models behavioral despair constructs with construct validity to human depression symptomatology, supporting translational biomarker alignment.
- Preclinical Continuity: Bridges target validation to efficacy testing in chronic stress models by providing an early-phase behavioral screen.
- Risk-Adjusted Advancement: Enables go/no-go decisions based on statistically significant reductions in immobility versus vehicle controls, de-risking later-stage investment.
Pipeline & Workflow Integration
The tail suspension test fits within the discovery continuum from target hypothesis testing through lead identification to preclinical efficacy assessment, particularly for CNS depression indications where behavioral despair is a measurable endpoint.
- Discovery Biology: Tests mechanistic hypotheses by measuring behavioral responses to pharmacological or genetic manipulations of mood-regulating circuits.
- Screening: Provides assay-ready output (immobility time) that enables comparison across treatment groups in dose-response studies.
- Analytics: Generates continuous, quantifiable data (seconds of immobility) suitable for statistical comparison and effect size calculation.
- Translational Research: Aligns with FDA guidance on animal models for psychiatric disorders by assessing core symptomatology domains relevant to clinical endpoints.
- Enterprise Reuse: Establishes a transferable behavioral platform applicable across indication areas involving motivation, reward, and affective processing.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in target validation by linking molecular modulation to ethologically relevant behavioral outputs.
- Operational Value: Enhances reproducibility through standardized training protocols and scorer reliability benchmarks.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early elimination of compounds lacking behavioral efficacy.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by identifying compounds with dose-dependent and reproducible effects on behavioral despair.
Implementation Considerations
- Requires behavioral neuroscience expertise in rodent handling and ethogram interpretation to ensure accurate scoring of mobility versus immobility.
- Depends on video recording infrastructure and controlled environmental conditions (light, sound, odor) to minimize confounding variables.
- Necessitates cross-team standardization of scoring criteria and inter-rater reliability testing before deployment in screening campaigns.
- Involves adaptation considerations for mouse strain-specific behaviors (e.g., tail climbing in C57BL/6) requiring mechanical interventions such as tail cylinders.
- Limited to mice due to apparatus size and behavioral validity; not scalable to rats or non-rodent species without significant redesign.
