La prueba de la suspensión trasera
28 de enero de 2012
La prueba de la cola de suspensión se valida como un procedimiento experimental para evaluar la eficacia de los tratamientos farmacológicos antidepresivos en ratones. Los ratones son suspendidos por la cola durante seis minutos y escapar de conductas relacionadas con la evaluación son. Se describen los procedimientos utilizados en la realización de la prueba de suspensión de la cola.
El test de suspensión por la cola es una prueba conductual común utilizada para predecir la eficacia antidepresiva de diversas manipulaciones experimentales. Este video demuestra los procedimientos de esta prueba. El test de suspensión por la cola está validado para el ratón y no se recomienda para roedores más grandes.
En la prueba de suspensión por la cola, los ratones se suspenden por sus colas. El ratón permanece suspendido durante seis minutos. Los comportamientos del sujeto se registran durante este tiempo.
Al finalizar el período de prueba de seis minutos, se retira la cinta de la cola del sujeto. Una vez finalizada la prueba, las grabaciones visuales se transfieren a una computadora o monitor de video. Para el análisis, un observador mide el tiempo que un ratón pasa forcejeando durante toda la sesión de seis minutos.
Los compuestos con propiedades antidepresivas aumentan el tiempo que los ratones pasan luchando. Esto se refleja en períodos más cortos de inmovilidad. Por ejemplo, hemos informado que el medicamento estabilizador del estado de ánimo litio, que es clínicamente útil como medicamento antidepresivo adyuvante, redujo el tiempo de inmovilidad en la prueba de suspensión por la cola.
Hola, mi nombre es Sean del laboratorio del Dr. Todd Gould en el Departamento de Psiquiatría de la Escuela de Medicina de la Universidad de Maryland en Baltimore. Hola, soy Chantel del mismo laboratorio. En este video, les mostraremos cómo realizar y puntuar la prueba de suspensión por la cola.
La prueba de suspensión por la cola se utiliza para evaluar la eficacia potencial de los tratamientos antidepresivos. Así que vamos al laboratorio y le mostraremos cómo realizar el experimento. Aunque no es obligatorio, utilizamos una caja de suspensión por la cola especialmente diseñada.
Para esta prueba, nuestra caja de suspensión por la cola está dividida en cuatro compartimentos, cada uno reservado para un solo ratón. Los divisores impiden que los ratones se observen entre sí durante la prueba.
Sin embargo, es posible utilizar un estante u otra estructura para suspender a los ratones. Las dimensiones de la caja del test de suspensión por la cola se seleccionan para impedir que los ratones alcancen y se sujeten a los bordes. Antes de comenzar el experimento, corte suficientes fragmentos de cinta y marque el segmento que se utilizará para la adhesión a la cola.
En nuestro laboratorio, utilizaremos fragmentos de cinta de 17 centímetros. A dos centímetros del extremo de este fragmento de cinta se debe hacer una marca y se usará para adherirlo a la cola. Colocamos la cola en el centro de esta porción de dos centímetros.
Coloque la caja del test de suspensión por la cola y la cámara de video. Antes de introducir los animales, la caja debe limpiarse minuciosamente con una solución esterilizante para neutralizar los olores dejados por los sujetos anteriores. En nuestro laboratorio, utilizamos dos cajas de suspensión por la cola, idénticas en todos los aspectos excepto en el color.
Para ratones albinos, una caja gris oscuro proporciona un buen contraste para las grabaciones de video. Para cepas de ratones de color más oscuro, es apropiada una caja blanca. Encienda la máquina de ruido blanco.
Debe enmascarar cualquier sonido intermitente. Lleve los ratones a la sala de procedimientos para que se aclimaten. Las condiciones en la sala deben mantenerse constantes y libres de ruidos, cambios en los niveles de luz y otras posibles interrupciones.
Este periodo generalmente es de al menos una hora. Una vez finalizado el periodo de aclimatación, se puede proceder con la prueba para evitar que ciertas cepas de ratones trepen por sus colas. Durante la prueba de suspensión por la cola, utilizamos cilindros de plástico que colocamos sobre las colas.
Estos cilindros descansan en la base de la cola durante la prueba. En nuestro laboratorio, utilizamos cilindros de plástico que miden cuatro centímetros de largo, un centímetro de diámetro y pesan 1,5 gramos. Si se utilizan cilindros de plástico para evitar el trepado, deben colocarse en las colas antes de aplicar la cinta.
Aplicamos cinta en el extremo mismo de la cola, dejando entre dos y tres milímetros de la cola fuera de la cinta. Adhiera la cinta a las colas de los ratones en su jaula de alojamiento. Utilice el extremo marcado de la cinta y asegúrese de que la cinta se adhiera a la cola y se pegue sobre sí misma.
Una vez aplicada la cinta, sujete a cada ratón a las paredes de la jaula para evitar que se enreden las cintas unidas a diferentes animales. Complete este proceso rápidamente; de lo contrario, los ratones se verán sometidos a un estrés innecesario.
La grabación debe iniciarse antes de que los animales sean suspendidos. Suspenda los animales colocando el extremo libre de la cinta en la barra de suspensión en un orden que esté contrabalanceado entre los grupos de tratamiento y de manera que no obstruya la vista de la cámara. Dado que los ratones se suspenden uno por uno, cada animal tiene un tiempo de inicio ligeramente diferente para la prueba.
Asegúrese de comenzar a puntuar a cada ratón exactamente al inicio de su período de suspensión. Es importante no obstruir la vista de la cámara. Dado que toda la sesión de suspensión por la cola será puntuada, obstruir la vista de la cámara podría provocar pérdida de datos.
Asegúrese de que todos los extremos de la cinta sean perpendiculares a la barra de suspensión y tengan la misma longitud de holgura. Para cada sujeto, inicie el cronómetro. La prueba de suspensión por la cola dura seis minutos.
Una vez transcurrido el período de prueba de seis minutos, retire la cinta del extremo de cada cola y devuelva los ratones a su jaula de origen. Al finalizar la prueba, se debe grabar en video la información del sujeto. Después de que los ratones sean devueltos a la sala de colonia, la caja de prueba debe limpiarse y desinfectarse completamente con una solución de esterilización.
Ahora que hemos terminado con la prueba, discutiremos la evaluación de los comportamientos. La única variable que se evalúa normalmente al puntuar la prueba de suspensión por la cola es el tiempo que los animales permanecen inmóviles. Para obtener el tiempo de inmovilidad, mediremos el tiempo que los ratones están en movimiento y lo restaremos del tiempo total de la prueba, que es de seis minutos. Evaluaremos los seis minutos completos de la prueba.
Primero cubrimos a los ratones que no están siendo evaluados para permitir que el observador se enfoque únicamente en un animal durante cada período de tiempo por ratón. La movilidad se mide mediante un cronómetro en pantalla controlado por un dispositivo de juego. Aquí, como pueden ver, hay dos cronómetros en pantalla separados que se controlan simultáneamente.
El primer cronómetro cuenta regresivamente desde 360 segundos e indica la duración de la prueba al observador. El segundo cronómetro mide el tiempo que los sujetos permanecen en movimiento. Como podrá notar, el segundo cronómetro está cubierto por el primero y solo sus decimales de milisegundos son visibles para el observador.
De esta manera, el observador podrá ver si el cronómetro está contando, pero no podrá ver el tiempo total de movilidad hasta que la puntuación haya finalizado. Hacemos esto para evitar que el sesgo del observador afecte los resultados. Los ratones, especialmente al inicio de la sesión, manifiestan comportamientos relacionados con la huida.
Estos comportamientos incluyen intentar alcanzar las paredes del aparato y la barra de suspensión, sacudidas intensas del cuerpo y movimientos de las extremidades similares a correr. Estos movimientos constituyen claramente movilidad. Sin embargo, a medida que avanza la prueba, los movimientos se vuelven más sutiles.
En nuestro laboratorio, no contamos como movilidad los pequeños movimientos restringidos a las patas delanteras, sin ningún desplazamiento de las patas traseras. Además, no se considera movilidad el balanceo similar al de un péndulo que se debe al impulso adquirido durante episodios previos de movilidad. Ahora veamos la puntuación de una sesión real de la prueba de suspensión por la cola.
Generalmente se informa el tiempo de inmovilidad, no el tiempo de movilidad. El tiempo de inmovilidad se puede calcular restando el tiempo total de movilidad del tiempo de prueba de 360 segundos. Puntuación. La prueba de suspensión por la cola requiere entrenamiento y práctica.
Es importante establecer un estándar interno en el laboratorio y capacitar a nuevos observadores hasta que alcancen un alto nivel de fiabilidad. En este artículo, explicamos cómo realizar y puntuar la prueba de suspensión por la cola. Buena suerte con sus futuros experimentos.
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Descripción general
El test de suspensión por la cola es un procedimiento conductual validado utilizado para evaluar la eficacia antidepresiva de tratamientos farmacológicos en ratones. Durante este test, los ratones son suspendidos por la cola durante seis minutos, y se registran sus comportamientos relacionados con la huida.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia conductual
- Psicofarmacología
- Modelos animales de depresión
Antecedentes
- El test de suspensión por la cola se utiliza ampliamente en la investigación para evaluar los efectos antidepresivos.
- Este test está específicamente validado para su uso en ratones y no es adecuado para roedores más grandes.
- Proporciona información sobre la eficacia de diversas manipulaciones experimentales.
- Las observaciones del comportamiento durante el test pueden indicar el nivel de desesperanza o la disposición para escapar.
Objetivo del estudio
- Demostrar los procedimientos del test de suspensión por la cola.
- Validar el test como una medida confiable de la eficacia antidepresiva.
- Proporcionar un método estandarizado para evaluar las respuestas conductuales en ratones.
Métodos Utilizados
- Los ratones son suspendidos por la cola durante un período de seis minutos.
- Las respuestas conductuales se registran y analizan durante el período de suspensión.
- La prueba evalúa comportamientos relacionados con la huida que indican niveles de estado de ánimo y ansiedad.
- Se siguen procedimientos estandarizados para garantizar la consistencia y la fiabilidad.
Resultados principales
- Los datos conductuales recopilados durante la prueba pueden correlacionarse con los resultados del tratamiento antidepresivo.
- La prueba diferencia eficazmente los efectos de diversas drogas sobre el estado de ánimo.
- Los resultados contribuyen a la comprensión de la depresión y la eficacia del tratamiento en modelos animales.
- Los resultados estandarizados pueden ayudar en el desarrollo de nuevas terapias antidepresivas.
Conclusiones
- El test de suspensión por la cola es una herramienta valiosa para evaluar la eficacia de antidepresivos en ratones.
- Proporciona un método confiable para que los investigadores evalúen las respuestas conductuales a tratamientos.
- El uso continuado de este test puede mejorar la comprensión de la depresión y de sus tratamientos farmacológicos.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
La prueba de suspensión por la cola proporciona una lectura conductual estandarizada para evaluar la actividad similar a la de un antidepresivo en modelos preclínicos, apoyando la validación temprana de dianas y la reducción de riesgos mecanicistas de compuestos activos sobre el sistema nervioso central. Al cuantificar conductas orientadas a la huida como un indicador del desespero conductual, el ensayo permite el cribado de alto rendimiento de terapéuticas prometedoras con confianza predictiva en indicaciones de trastornos del estado de ánimo. Este ensayo orienta las decisiones de avance o interrupción en las fases de descubrimiento al vincular la modulación farmacológica con resultados conductuales cuantificables relevantes para la eficacia antidepresiva.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Valor científico: Examina hipótesis terapéuticas relacionadas con las vías monoaminérgicas y glutamatérgicas implicadas en la regulación del estado de ánimo.
- Valor operativo: Permite la validación funcional de dianas mediante cambios dependientes de la dosis en el tiempo de inmovilidad, reduciendo los falsos positivos en la interacción con la diana.
- Valor predictivo: Facilita la selección de carteras al identificar compuestos con efectos sostenidos sobre la desesperanza conductual en múltiples quimiotipos.
Desarrollo de Cribado y Ensayos
- Listo para ensayos: Proporciona métricas cuantitativas basadas en el tiempo de inmovilidad adecuadas para la automatización y formatos de cribado en placas.
- Reproducibilidad: La duración estandarizada de la suspensión y los protocolos de puntuación minimizan la variabilidad entre observadores cuando se cumplen los umbrales internos de fiabilidad.
- Escalabilidad: Compatible con cajas de prueba multiparceladas y sistemas de seguimiento por video para la evaluación paralela de bibliotecas de compuestos.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Relevancia para la enfermedad: Modela constructos de desesperanza conductual con validez de constructo respecto a la sintomatología depresiva humana, favoreciendo la alineación translacional de biomarcadores.
- Continuidad preclínica: Conecta la validación de dianas con pruebas de eficacia en modelos de estrés crónico al proporcionar una cribado conductual en fase temprana.
- Avance ajustado al riesgo: Permite tomar decisiones de avance o interrupción del proyecto basadas en reducciones estadísticamente significativas del inmovilismo frente a los controles con vehículo, reduciendo el riesgo en inversiones posteriores.
Integración de la tubería y flujo de trabajo
La prueba de suspensión por la cola se enmarca dentro del continuo de descubrimiento, desde la verificación de hipótesis sobre dianas hasta la identificación de compuestos activos y la evaluación de la eficacia preclínica, especialmente para indicaciones de depresión del SNC donde la desesperanza conductual es un punto final medible.
- Biología del Descubrimiento: Evalúa hipótesis mecanicistas mediante la medición de respuestas conductuales a manipulaciones farmacológicas o genéticas de circuitos reguladores del estado de ánimo.
- Selección: Proporciona un resultado listo para ensayos (tiempo de inmovilidad) que permite la comparación entre grupos de tratamiento en estudios de respuesta a la dosis.
- Análisis: Genera datos continuos y cuantificables (segundos de inmovilidad) adecuados para comparación estadística y cálculo del tamaño del efecto.
- Investigación Translacional: Se alinea con las directrices de la FDA sobre modelos animales para trastornos psiquiátricos al evaluar dominios de sintomatología fundamental relacionados con los resultados clínicos.
- Reutilización Empresarial: Establece una plataforma conductual transferible aplicable en diversas áreas de indicación que involucran motivación, recompensa y procesamiento afectivo.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva en la validación de objetivos al vincular la modulación molecular con resultados conductuales etológicamente relevantes.
- Valor operativo: Mejora la reproducibilidad mediante protocolos estandarizados de entrenamiento y criterios de fiabilidad para evaluadores.
- Valor estratégico: Mejora la eficiencia del capital al permitir la eliminación temprana de compuestos que carecen de eficacia conductual.
- Impacto en la cartera: Apoya la priorización ajustada al riesgo mediante la identificación de compuestos con efectos dependientes de la dosis y reproducibles sobre la desesperanza conductual.
Consideraciones de Implementación
- Requiere experiencia en neurociencia del comportamiento en el manejo de roedores y en la interpretación de etogramas para garantizar una puntuación precisa entre movilidad e inmovilidad.
- Depende de infraestructura para grabación de video y condiciones ambientales controladas (luz, sonido, olor) para minimizar variables de confusión.
- Necesita la estandarización entre equipos de los criterios de puntuación y pruebas de fiabilidad interevaluadores antes de su implementación en campañas de cribado.
- Implica consideraciones de adaptación para comportamientos específicos de cepas de ratones (por ejemplo, el trepado de cola en C57BL/6) que requieren intervenciones mecánicas como cilindros para la cola.
- Se limita a ratones debido al tamaño del aparato y a la validez del comportamiento; no es escalable a ratas ni a especies no roedoras sin una rediseño significativo.
